OP46
AcM de ratón (IF2) Anti-MDM2 (Ab-1)
liquid, clone IF2, Calbiochem®
Sinónimos:
Anti-doble minuto murino cromosoma-2, Anti-ubiquitina ligasa, Anti-proteína de unión p53
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About This Item
UNSPSC Code:
12352203
NACRES:
NA.41
Productos recomendados
biological source
mouse
Quality Level
antibody form
purified antibody
antibody product type
primary antibodies
clone
IF2, monoclonal
form
liquid
contains
≤0.1% sodium azide as preservative (100 μg only)
species reactivity
human
should not react with
mouse
manufacturer/tradename
Calbiochem®
storage condition
do not freeze
isotype
IgG2b
shipped in
wet ice
storage temp.
2-8°C
target post-translational modification
unmodified
Gene Information
human ... MDM2(4193)
mouse ... Mdm2(17246)
General description
Anticuerpo monoclonal de ratón purificado (véase referencias de la aplicación). Reconoce la proteína MDM2 de ~90 kDa (PM aparente). También reconoce isoformas a ~57 y ~74/76 kDa.
Este AcM anti-MDM2 (Ab-1) de ratón (IF2) está validado para su uso en cortes congelados Inmunotransferencia Inmunofluorescencia Inmunoprecipitación Cortes en parafina para la detección de MDM2 (Ab-1).
Reconoce la proteína MDM2 de ~90 kDa (PM aparente). También reconoce isoformas de ~57 kDa y ~74/76 kDa mediante inmunotransferencia.
Immunogen
Epítopo: en los aminoácidos 26-169 de la MDM2 humana
Humana
MDM2 humana
Application
Cortes congelados (1-5 µg/ml, ver referencias de aplicación)
Inmunotransferencia (0.5-2 µg/ml, quimioluminiscencia)
Inmunofluorescencia (1-5 µg/ml)
Inmunoprecipitación (1 µg/muestra)
Cortes en parafina (1-5 µg/ml, pretratamiento térmico necesario, ver referencias de aplicación)
Inmunotransferencia (0.5-2 µg/ml, quimioluminiscencia)
Inmunofluorescencia (1-5 µg/ml)
Inmunoprecipitación (1 µg/muestra)
Cortes en parafina (1-5 µg/ml, pretratamiento térmico necesario, ver referencias de aplicación)
Packaging
Consulte la etiqueta del vial para conocer la concentración específica del lote.
Warning
Toxicidad: Manipulación estándar (A)
Physical form
En tampón fosfato de sodio 50 mM, gelatina al 0,2 %.
Analysis Note
Control positivo
Células OSA-CL
Células OSA-CL
Other Notes
Gorgoulis, V.G., et al. 1996. J. Pathol.180, 129.
Marchetti, A., et al. 1995. J. Pathol.175, 31.
Barak, Y., et al. 1993. EMBO J.12, 461.
Ladanyi, M., et al. 1993. Cancer Res.53, 16.
Leach, F.S., et al. 1993. Cancer Res.53, 2231.
Oliner, J.D., et al. 1993. Nature362, 857.
Momand, J., et al. 1992. Cell69, 1237.
Oliner, J.D., et al. 1992. Nature358, 80.
Fakharzadeh, S.S., et al. 1991. EMBO J. 10, 1565.
Marchetti, A., et al. 1995. J. Pathol.175, 31.
Barak, Y., et al. 1993. EMBO J.12, 461.
Ladanyi, M., et al. 1993. Cancer Res.53, 16.
Leach, F.S., et al. 1993. Cancer Res.53, 2231.
Oliner, J.D., et al. 1993. Nature362, 857.
Momand, J., et al. 1992. Cell69, 1237.
Oliner, J.D., et al. 1992. Nature358, 80.
Fakharzadeh, S.S., et al. 1991. EMBO J. 10, 1565.
La secuencia de aminoácidos de la MDM2 predice una proteína con una masa molecular de aproximadamente 54 kDa, pero la proteína MDM2 migra en SDS/PAGE con una movilidad aparente de 90 kDa.
Protocolo de inmunotransferencia
Puede utilizarse la MDM2 (Ab-1) para detectar la MDM2 mediante transferencia Western de proteínas previamente separadas por SDS/PAGE y transferidas mediante electroforesis a las membranas de nitrocelulosa. Las proteínas se hacen reaccionar con el anticuerpo monoclonal y se visualizan utilizando un anticuerpo de cabra anti-ratón conjugado con HRP, con detección quimioluminiscente.
Material
Equipo:
• Aparatos de electroforesis
• Aparatos de electrotransferencia
• Plataforma basculante
Disoluciones y reactivos
• AcM de ratón Anti-MDM2 (Ab-1) (IF2) Nº Ref. OP46 o OP46T
• Cadenas ligeras y pesadas de la IgG anti-ratón de cabra conjugada con HRP (por ejemplo, nº de ref. 401215)
• Sistema de detección de quimioluminiscencia
• Disolución tampón ELB (incluye una combinación de inhibidores de proteasas, como 0,5 µg/ml de leupeptina, 1 µg/ml de pepstatina, EDTA 1 mM y PMSF 0,2 mM): Hepes 50 mM pH 7,0, NaCl 250 mM, EDTA 0,5 mM, Nonidet P-40 alternativo al 0,1 %
• SDS-PAGE ( acrilamida al 7 %)
• Disolución salina tamponada con fosfato (PBS) pH 7,4; 1 litro: 0,2 g de KCl, 0,2 g de KH2PO4, 8 g de NaCl, 1,15 g de Na2HPO4
• PBS/detergente Tween®-20 (PBST) al 0,1 %
• 1% de leche en polvo desnatada en PBST
Procedimiento
1. Lisar las células en tampón ELB. (Alternativamente, las células pueden lisarse en tampón RIPA o directamente en tampón de muestra Laemmli x1).
2. Someter a electroforesis a 50-100 µg de lisado utilizando un gel de acrilamida al 7 %.
3. Transferir las muestras de proteínas del gel de poliacrilamida a una membrana de nitrocelulosa utilizando un equipo de electrotransferencia.
4. Bloquear la membrana durante 1 h en PBST que contenga leche en polvo desnatada al 3% a temperatura ambiente con balanceo. Utilizar aproximadamente 1 ml por cm2 de membrana.
5. Incubar la membrana con 1 µg/ml de AcM Anti-MDM2 (Ab-1) de ratón (IF2) en leche seca al 3% sin grasa/ PBST durante 1 h a temperatura ambiente con balanceo.
6. Lavar la membrana 3 veces, 15 min cada una, en PBST a temperatura ambiente con balanceo.
7. Incubar la membrana con cadenas pesadas y ligeras de IgG anti-ratón conjugado con HRP diluido según las instrucciones del proveedor’, en leche en polvo desnatada al 3 %/ PBST a temperatura ambiente durante 1 h.
8. Lavar la membrana 4 veces, 15 min cada una, en PBST a temperatura ambiente con balanceo.
9. Revelar la membrana utilizando reactivos de detección con quimioluminiscencia de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
10. Exponer la membrana a la película durante diez minutos. Ajustar los tiempos de exposición posteriores según sea necesario.
Protocolo de inmunotransferencia
Puede utilizarse la MDM2 (Ab-1) para detectar la MDM2 mediante transferencia Western de proteínas previamente separadas por SDS/PAGE y transferidas mediante electroforesis a las membranas de nitrocelulosa. Las proteínas se hacen reaccionar con el anticuerpo monoclonal y se visualizan utilizando un anticuerpo de cabra anti-ratón conjugado con HRP, con detección quimioluminiscente.
Material
Equipo:
• Aparatos de electroforesis
• Aparatos de electrotransferencia
• Plataforma basculante
Disoluciones y reactivos
• AcM de ratón Anti-MDM2 (Ab-1) (IF2) Nº Ref. OP46 o OP46T
• Cadenas ligeras y pesadas de la IgG anti-ratón de cabra conjugada con HRP (por ejemplo, nº de ref. 401215)
• Sistema de detección de quimioluminiscencia
• Disolución tampón ELB (incluye una combinación de inhibidores de proteasas, como 0,5 µg/ml de leupeptina, 1 µg/ml de pepstatina, EDTA 1 mM y PMSF 0,2 mM): Hepes 50 mM pH 7,0, NaCl 250 mM, EDTA 0,5 mM, Nonidet P-40 alternativo al 0,1 %
• SDS-PAGE ( acrilamida al 7 %)
• Disolución salina tamponada con fosfato (PBS) pH 7,4; 1 litro: 0,2 g de KCl, 0,2 g de KH2PO4, 8 g de NaCl, 1,15 g de Na2HPO4
• PBS/detergente Tween®-20 (PBST) al 0,1 %
• 1% de leche en polvo desnatada en PBST
Procedimiento
1. Lisar las células en tampón ELB. (Alternativamente, las células pueden lisarse en tampón RIPA o directamente en tampón de muestra Laemmli x1).
2. Someter a electroforesis a 50-100 µg de lisado utilizando un gel de acrilamida al 7 %.
3. Transferir las muestras de proteínas del gel de poliacrilamida a una membrana de nitrocelulosa utilizando un equipo de electrotransferencia.
4. Bloquear la membrana durante 1 h en PBST que contenga leche en polvo desnatada al 3% a temperatura ambiente con balanceo. Utilizar aproximadamente 1 ml por cm2 de membrana.
5. Incubar la membrana con 1 µg/ml de AcM Anti-MDM2 (Ab-1) de ratón (IF2) en leche seca al 3% sin grasa/ PBST durante 1 h a temperatura ambiente con balanceo.
6. Lavar la membrana 3 veces, 15 min cada una, en PBST a temperatura ambiente con balanceo.
7. Incubar la membrana con cadenas pesadas y ligeras de IgG anti-ratón conjugado con HRP diluido según las instrucciones del proveedor’, en leche en polvo desnatada al 3 %/ PBST a temperatura ambiente durante 1 h.
8. Lavar la membrana 4 veces, 15 min cada una, en PBST a temperatura ambiente con balanceo.
9. Revelar la membrana utilizando reactivos de detección con quimioluminiscencia de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
10. Exponer la membrana a la película durante diez minutos. Ajustar los tiempos de exposición posteriores según sea necesario.
Legal Information
CALBIOCHEM is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
TWEEN is a registered trademark of Croda International PLC
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Storage Class
10 - Combustible liquids
wgk_germany
nwg
flash_point_f
Not applicable
flash_point_c
Not applicable
Certificados de análisis (COA)
Busque Certificados de análisis (COA) introduciendo el número de lote del producto. Los números de lote se encuentran en la etiqueta del producto después de las palabras «Lot» o «Batch»
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