Tampones de migración TAE y TBE, receta y vídeo
¿Qué son el Tris acetato EDTA y el Tris borato EDTA?
El Tris acetato EDTA (TAE) y el tris borato EDTA (TBE) son los dos tampones de migración más comunes utilizados en la electroforesis de los ácidos nucleicos. Como amortiguadores, tienen un pH bastante constante y son capaces de conducir la electricidad debido a su concentración de iones hidrógeno. Estas propiedades son necesarias para la electroforesis en gel durante la cual las proteínas se separan por carga eléctrica.
Preparación de los tampones de migración
TBE y TAE suelen mezclarse a partir de sus componentes en disoluciones madre de laboratorio. Ambos tampones pueden comprarse a la concentración de trabajo o en un formato en polvo o concentrado que se prepara simplemente mediante dilución.
Consulte las siguientes recetas para preparar TAE y TBE a concentraciones habituales de disolución de reserva. Nuestra calculadora de disoluciones tampón también puede ayudarle a encontrar la dilución (o conversión) correcta para varios tampones, a partir de la disolución de reserva hasta la molaridad y el volumen deseados.
Vídeo: Tampones TAE y TBE para electroforesis en gel
Revise las recetas habituales de preparación de las disoluciones tampón TAE y TBE y sepa qué tampón de migración elegir para su aplicación de electroforesis en gel de ácidos nucleicos. El especialista en tecnología experimental Chris Lemke mezcla disoluciones de reserva y proporciona útiles consejos de selección de tampones.
Este video se elaboró en colaboración conSeeding Labs, una organización sin fines de lucro que conecta universidades e institutos de investigación en países en vías de desarrollo con equipos excedentes de alta calidad de laboratorio, capacitación e intercambios profesionales.
Receta de disolución tampón TAE concentrado 50 veces de reserva
- 242 g de base tris en H2O bidestilada
- 57,1 ml de ácido acético glacial
- 100 ml de disolución de EDTA 0,5 M (pH 8,0)
Ajuste el volumen a 1 l.
Receta de TAE concentrado 10 veces
Para 1 l de disolución a concentración x10,
- 48,5 g tris
- 11,4 ml de ácido acético glacial
- 20 ml EDTA 0,5 M (pH 8,0)
Receta de TAE a concentración x1
Diluya 1:10
- Tris acetato 0,4 M (pH aproximadamente 8,3)
- EDTA 0,01 M
Utilizando agua ultrapura.
Receta de disolución tampón TBE de reserva concentrado 10 veces
- 108 g de base tris
- 55 g de ácido bórico
- 900 ml de H2O bidestilada
- 40 ml de disolución de EDTA 0,5 M (pH 8,0)
Ajuste el volumen a 1 l.
Preparación de TBE x1
Diluya 10 veces el tampón TBE concentrado x10 con agua ultrapura.
La disolución final debe contener:
- Tris 0,13 M (pH 7,6)
- Ácido bórico mM
- EDTA 2,5 mM
Consejos de preparación de la disolución tampón
- Si se observa precipitación, caliente a 37 °C y mezcle hasta disolución completa antes de la dilución.
- Se recomienda filtrar las disoluciones de trabajo 1x a través de un filtro de 0,2 mm antes de su uso.
- La disoluciones de trabajo concentradas x1 pueden utilizarse hasta la fecha de vencimiento indicada en el embalaje con almacenamiento a temperatura ambiente. Deseche si el tampón aparece turbio o cambia de color.
Tabla de comparación de TAE frente a TBE |
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Aplicaciones
Los tampones tris-acetato-EDTA (TAE) y el tris-borato-EDTA (TBE) son tampones de uso común en la electroforesis en gel de agarosa del ADN que son especialmente útiles en el trabajo preparativo.1
En comparación con los tampones tris-borato-EDTA (TBE) y tris-fosfato-EDTA (TPE), el ADN de doble cadena tiende a correr más rápido en el TAE. Sin embargo, debido a que TAE tiene la capacidad de amortiguación más baja de los tres tampones, la capacidad de amortiguación puede agotarse durante una electroforesis extendida. La circulación o la sustitución del tampón pueden remediar esta situación.
TAE
El tampón TAE x1 se utiliza tanto en el gel de agarosa como en un tampón de migración. Se recomiendan voltajes aplicados de < 5 V/cm (la distancia entre los electrodos de la unidad) para una resolución máxima.2
El tampón TAE se ha utilizado en la electroforesis en gel de agarosa del ARN.3,4
Se ha comunicado un estudio de movilidad libre de la disolución de ADN en TAE a diversas concentraciones de amortiguador, en presencia y ausencia de NaCl añadido.5
Se ha descrito el uso de tampón TAE en un método de electroforesis en gel de gradiente desnaturalizante para análisis de una amplia variedad de mutaciones.
TBE
El tampón TBE se recomienda para la resolución de fragmentos de ARN y ADN inferiores a 1500 pb.
El TBE se utiliza con geles no desnaturalizantes o desnaturalizantes(urea 7 M).
También se utiliza habitualmente para el gel de secuenciación automatizada del ADN.
El tampón Tris-borato-EDTA se ha utilizado para la electroforesis en gel de campo pulsado (PFGE). Se recomiendan voltajes aplicados de menos de 5 V/cm para una resolución máxima.
El tampón Bionic es una alternativa única a los tampones tradicionales para la electroforesis, TBE (tris-borato-EDTA) y TAE (tris-acetato-EDTA). El tampón Bionic permite:
- Resolución de banda en minutos
- Migración de los geles 2-3 veces más rápida que en TBE/TAE
- Bandas más nítidas en menos tiempo
- Usar con geles prefabricados
Referencias bibliográficas
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