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EDR1 physically interacts with MKK4/MKK5 and negatively regulates a MAP kinase cascade to modulate plant innate immunity.

PLoS genetics (2014-05-17)
Chunzhao Zhao, Haozhen Nie, Qiujing Shen, Shuqun Zhang, Wolfgang Lukowitz, Dingzhong Tang
RESUMEN

Mitogen-activated protein (MAP) kinase signaling cascades play important roles in the regulation of plant defense. The Raf-like MAP kinase kinase kinase (MAPKKK) EDR1 negatively regulates plant defense responses and cell death. However, how EDR1 functions, and whether it affects the regulation of MAPK cascades, are not well understood. Here, we showed that EDR1 negatively regulates the MKK4/MKK5-MPK3/MPK6 kinase cascade in Arabidopsis. We found that edr1 mutants have highly activated MPK3/MPK6 kinase activity and higher levels of MPK3/MPK6 proteins than wild type. EDR1 physically interacts with MKK4 and MKK5, and this interaction requires the N-terminal domain of EDR1. EDR1 also negatively affects MKK4/MKK5 protein levels. In addition, the mpk3, mkk4 and mkk5 mutations suppress edr1-mediated resistance, and over-expression of MKK4 or MKK5 causes edr1-like resistance and mildew-induced cell death. Taken together, our data indicate that EDR1 physically associates with MKK4/MKK5 and negatively regulates the MAPK cascade to fine-tune plant innate immunity.

MATERIALES
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Sigma-Aldrich
Sacarosa, for molecular biology, ≥99.5% (GC)
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Sigma-Aldrich
ANTI-FLAG® M2 monoclonal antibody produced in mouse, 1 mg/mL, clone M2, affinity isolated antibody, buffered aqueous solution (50% glycerol, 10 mM sodium phosphate, and 150 mM NaCl, pH 7.4)
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Magnesium chloride solution, for molecular biology, 1.00 M±0.01 M
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Magnesium chloride, anhydrous, ≥98%
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Sacarosa, ≥99.5% (GC), BioXtra
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Sacarosa, BioUltra, for molecular biology, ≥99.5% (HPLC)
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Comprimidos de cóctel de inhibidores de proteasas SIGMAFAST sin EDTA, for use in purification of Histidine-tagged proteins
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Sacarosa, United States Pharmacopeia (USP) Reference Standard
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Ethylenediaminetetraacetic acid solution, 0.02% in DPBS (0.5 mM), sterile-filtered, BioReagent, suitable for cell culture
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Sacarosa, ≥99.5% (GC), BioReagent, suitable for cell culture, suitable for insect cell culture
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Sacarosa, ≥99.5% (GC)
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Magnesium chloride, powder, <200 μm
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Ethylenediaminetetraacetic acid, anhydrous, crystalline, BioReagent, suitable for cell culture
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Ethylenediaminetetraacetic acid, 99.995% trace metals basis
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Sacarosa, ≥99.5% (GC), Grade II, suitable for plant cell culture
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Anticuerpo anti-HA, monoclonal de ratón antibody produced in mouse, clone HA-7, purified from hybridoma cell culture
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Magnesium chloride solution, BioUltra, for molecular biology, 2 M in H2O
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Magnesium chloride, BioReagent, suitable for insect cell culture, ≥97.0%
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Sacarosa, Grade I, ≥99% (GC), suitable for plant cell culture
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Nitrogen, ≥99.998%
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Ethylenediaminetetraacetic acid, ACS reagent, 99.4-100.6%, powder
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Magnesium chloride solution, PCR Reagent, 25 mM MgCI2 solution for PCR
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Sacarosa, meets USP testing specifications
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Magnesium chloride, AnhydroBeads, −10 mesh, 99.9% trace metals basis
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Ethylenediaminetetraacetic acid, anhydrous, BioUltra, ≥99% (titration)
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Ethylenediaminetetraacetic acid disodium salt solution, BioUltra, for molecular biology, pH 8.0, ~0.5 M in H2O
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Supelco
Sacarosa, Pharmaceutical Secondary Standard; Certified Reference Material
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Magnesium chloride solution, 0.1 M
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