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一般說明
由博德研究所(Broad Institute)Feng Zhang实验室开发的人类GeCKO v2(一体化载体)文库,包含100,000多个独特的gRNA,用于人类基因组的基因敲除。 利用慢病毒CRISPR一体化的带有嘌呤霉素筛选标记物的Cas9和gRNA共表达载体,与版本1相比,版本2载体可产生10倍以上的高滴度病毒。 人类单个载体系统GeCKO文库分装为8管,每管25 ul,最低滴度为5X10^8 TU/ml(由p24试验检测)。 GeCKO人类文库被作为2个1/2文库(A和B)进行交付。建议同时对A和B文库进行筛选,从而使每个基因对应6个sgRNA(每个文库提供3个sgRNA)。 两个文库均含有1000个非靶标对照sgRNA。A文库也会靶向miRNA(每个miRNA对应4个sgRNA)。
應用
功能基因组学/筛选/靶标验证
特點和優勢
- 使用CRISPR核酸酶敲除蛋白质编码基因,从而可对蛋白质功能进行评估
- 可在实验室中实现对人类全基因组(16,000多个基因)的有效筛选,无需机器人或特殊设备
- 大量内在的富集和缺失克隆,使研究人员对实现混合筛选实验结果更自信
- 慢病毒CRISPR可感染多种不同的哺乳细胞,通过共同表达1个密码子经优化的Cas9核酸酶和1个单导向RNA,促进基因敲除。
- 将人类GeCKO版本2文库的单载体系统用于无法将Cas9转导至人类细胞(如原代细胞)中的应用。
- 转导后,使用嘌呤霉素进行筛选。
準備報告
Puro Kill曲线和每毫升CFU(菌落形成单位)的测定。在进行文库规模的筛选之前,必须进行两个预实验。详见Sigma.com/pooledscreening。
其他說明
本产品仅供研&发使用,不得用于药物、家庭或其他用途。有关危险和安全处理方法的信息,请参阅材料安全数据表。尽管产生的慢病毒转导颗粒不能复制,但建议在实验室操作中将其视为2级风险(RGL-2)物种。遵循所有已发布的RGL-2实验室处理和废物净化指南。
儲存類別代碼
12 - Non Combustible Liquids
水污染物質分類(WGK)
WGK 3
閃點(°F)
Not applicable
閃點(°C)
Not applicable
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商品
Deconvolute pooled shRNA samples post-screening to identify significant TRC clones with our service.
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