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一般說明
人ERG
人类ether-a-go-go相关基因（hERG）是钾离子通道，对正常心脏复极化至关重要。 在药物筛选模型中，已证明hERG K+通道可抑制多种化合物，其阻滞作用可导致心脏QT间期延长和危及生命的心律失常（Murphy et al.2006）。 与IKr K+通道相关的心脏安全已成为监管机构关注的主要问题，因为已确定hERG通道抑制与QT延长具有最紧密联系（Chiu et al.2004）。Millipore′s hERG膜制剂是由HEK293稳定重组细胞系（Millipore目录号CYL3039）制备的粗制膜制剂，是筛选hERG通道拮抗剂的理想HTS工具。 膜制剂对[3H]-阿司咪唑的Kd为5.2 nM。 使用10 μg/孔hERG膜制剂和3.0 nM[3H]-阿司咪唑，获得了大于4倍的信背比。
細胞系描述
GPCR 细胞系
應用
放射性配体结合试验
生化／生理作用
蛋白靶标：hERG
靶标亚家族：钾
品質
表1. 在hERG膜制剂的竞争结合测定中获得的信背比和特异性结合值。
质量标准：1个单位 = 使用[3H]-阿司咪唑）的10 μg膜制剂
使用[3H]-阿司咪唑的Bmax：6.7 pmol/mg
[3H]-阿司咪唑的Kd： 5.2 nM
表2。 使用[3H]-阿司咪唑结合试验和E-Phys试验对各种小分子hERG抑制剂进行排序比较：
*数据获Chiu et al., 2004
| 10 µg/孔 | |
|---|---|
| 信背比 | 4.6 |
| 特异性结合（cpm） | 435 |
质量标准：1个单位 = 使用[3H]-阿司咪唑）的10 μg膜制剂
使用[3H]-阿司咪唑的Bmax：6.7 pmol/mg
[3H]-阿司咪唑的Kd： 5.2 nM
表2。 使用[3H]-阿司咪唑结合试验和E-Phys试验对各种小分子hERG抑制剂进行排序比较：
| 使用hERG膜制剂的结合Ki（nM） | hERG细胞系的电生理IC50（nM） | ||||
| Millipore CYL4039M | 文献值* | IonWorks PPC的Millipore CYL4039 | PatchExpress的Millipore CYL4039 | 膜片钳的文献值 | |
| 阿司咪唑 | 3.4 ± 0.7 | 3.3 ± 0.7 | 4.6 ± 0.003 | ND | 0.5 |
| 多非利特 | 5.8 ± 2.4 | 28 ± 6 | ND | ND | 15.3 ± 2.5 |
| E-4031 | 6.1 ± 0.8 | 58 ± 5 | 115 ± 0.02 | 144 ± 44 | 14 |
| 匹莫齐特 | 18.8 ± 2.3 | 14 ± 4 | ND | ND | 18 |
| 西沙必利 | 104.9 ± 30.9 | 123 ± 25 | 75.6 ± 0.02 | 5 ± 1 | 44.5 ± 10.6 |
| 氟哌啶醇 | 241.4 ± 21.4 | 234 ± 20 | ND | ND | 63 |
| 利培酮 | >4000 | 4302 ± 319 | ND | ND | 167 |
| 维拉帕米 | >4000 | 3902 ± 529 | 1332 ± 120 | 3100 ± 400 | 830 |
*数据获Chiu et al., 2004
規格
培养条件
推荐测定条件：将膜与放射性配体和未标记竞争剂（测试浓度见图1和2）在非结合96孔板的结合缓冲液中混合，并孵育1-2小时。过滤前，用0.33%聚乙烯亚胺包被FB 96孔收获板（Millipore目录号MAHF B1H）30分钟，然后用25 mM Tris（pH 7.4）、130 mM NaCl、5 mM KCl、0.8 mM CaCl2、0.1%BSA洗涤。 将结合反应物转移至滤板中，并用洗涤缓冲液洗涤6次（每次洗涤每孔250μL）。 将板干燥并计数。
结合缓冲液：10 mM Hepes，pH 7.4，130 mM NaCl，5 mM KCl，0.8 mM MgCl2，1 mM NaEGTA，10 mM葡萄糖，0.1%BSA，过滤并储存于4°C
放射性配体：[3H]-阿司咪唑（Perkin Elmer # NET-1140）
清洗缓冲液：25 mM Tris，pH值7.4，130 mM NaCl，5 mM KCl，0.8 mM MgCl2，0.05 mM CaCl2，0.1%BSA，过滤并储存在4°C
。
一个包装包含足以进行至少200次测定的膜（单位），其中一个单位是使用3H标记的阿司咪唑产生大于4倍信背比的膜量。
推荐测定条件：将膜与放射性配体和未标记竞争剂（测试浓度见图1和2）在非结合96孔板的结合缓冲液中混合，并孵育1-2小时。过滤前，用0.33%聚乙烯亚胺包被FB 96孔收获板（Millipore目录号MAHF B1H）30分钟，然后用25 mM Tris（pH 7.4）、130 mM NaCl、5 mM KCl、0.8 mM CaCl2、0.1%BSA洗涤。 将结合反应物转移至滤板中，并用洗涤缓冲液洗涤6次（每次洗涤每孔250μL）。 将板干燥并计数。
结合缓冲液：10 mM Hepes，pH 7.4，130 mM NaCl，5 mM KCl，0.8 mM MgCl2，1 mM NaEGTA，10 mM葡萄糖，0.1%BSA，过滤并储存于4°C
放射性配体：[3H]-阿司咪唑（Perkin Elmer # NET-1140）
清洗缓冲液：25 mM Tris，pH值7.4，130 mM NaCl，5 mM KCl，0.8 mM MgCl2，0.05 mM CaCl2，0.1%BSA，过滤并储存在4°C
。
一个包装包含足以进行至少200次测定的膜（单位），其中一个单位是使用3H标记的阿司咪唑产生大于4倍信背比的膜量。
外觀
溶于包装缓冲液中的液体：50 mM Tris（pH值7.4）、10%甘油和1%BSA，不含防腐剂。
包装方法：将膜蛋白在包装缓冲液中调节至指定的浓度，快速冷冻，并保存在-80°C下。
包装方法：将膜蛋白在包装缓冲液中调节至指定的浓度，快速冷冻，并保存在-80°C下。
儲存和穩定性
在–70°C下冷冻保存，直至标签上注明的失效日期。 请勿冷冻和解冻。
法律資訊
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10 - Combustible liquids
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