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Merck

GORAB Missense Mutations Disrupt RAB6 and ARF5 Binding and Golgi Targeting.

The Journal of investigative dermatology (2015-05-23)
Johannes Egerer, Denise Emmerich, Björn Fischer-Zirnsak, Wing Lee Chan, David Meierhofer, Beyhan Tuysuz, Katrin Marschner, Sascha Sauer, Francis A Barr, Stefan Mundlos, Uwe Kornak
RÉSUMÉ

Gerodermia osteodysplastica is a hereditary segmental progeroid disorder affecting skin, connective tissues, and bone that is caused by loss-of-function mutations in GORAB. The golgin, RAB6-interacting (GORAB) protein localizes to the Golgi apparatus and interacts with the small GTPase RAB6. In this study, we used different approaches to shed more light on the recruitment of GORAB to this compartment. We show that GORAB best colocalizes with trans-Golgi markers and is rapidly displaced upon Brefeldin A exposition, indicating a loose association with Golgi membranes. A yeast two-hybrid screening revealed a specific interaction with the small GTPase ADP-ribosylation factor (ARF5) in its active, GTP-bound form. ARF5 and RAB6 bind to GORAB via the same internal Golgi-targeting RAB6 and ARF5 binding (IGRAB) domain. Two GORAB missense mutations identified in gerodermia osteodysplastica patients fall within this IGRAB domain. GORAB carrying the mutation p.Ala220Pro had a cytoplasmic distribution and failed to interact with both RAB6 and ARF5. In contrast, the p.Ser175Phe mutation displaced GORAB from the Golgi compartment to vesicular structures and selectively impaired ARF5 binding. Our findings indicate that the IGRAB domain is crucial for the Golgi localization of GORAB and that loss of this localization impairs its physiological function.

MATÉRIAUX
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Sigma-Aldrich
Hydroxyde de sodium solution, BioUltra, for molecular biology, 10 M in H2O
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Sigma-Aldrich
Chlorure de sodium, for molecular biology, DNase, RNase, and protease, none detected, ≥99% (titration)
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Sigma-Aldrich
Chlorure de magnésium solution, for molecular biology, 1.00 M±0.01 M
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Sigma-Aldrich
Chlorure de magnésium, anhydrous, ≥98%
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Sigma-Aldrich
Hydroxyde de sodium solution, 1.0 N, BioReagent, suitable for cell culture
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Sigma-Aldrich
Chlorure de sodium solution, 0.9% in water, BioXtra, suitable for cell culture
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Sigma-Aldrich
Chlorure de sodium solution, 5 M in H2O, BioReagent, for molecular biology, suitable for cell culture
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Sigma-Aldrich
Chlorure de sodium, BioReagent, suitable for cell culture, suitable for insect cell culture, suitable for plant cell culture, ≥99%
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Sigma-Aldrich
L-Glutathion réduit, suitable for cell culture, BioReagent, ≥98.0%, powder
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SAFC
Chlorure de sodium solution, 5 M
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Sigma-Aldrich
Acide éthylènediaminetétraacétique solution, 0.02% in DPBS (0.5 mM), sterile-filtered, BioReagent, suitable for cell culture
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Sigma-Aldrich
Nocodazole, ≥99% (TLC), powder
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Sigma-Aldrich
Chlorure de magnésium, powder, <200 μm
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Sigma-Aldrich
Ethylenediaminetetraacetic acid, anhydrous, crystalline, BioReagent, suitable for cell culture
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Sigma-Aldrich
Ethylenediaminetetraacetic acid, 99.995% trace metals basis
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Sigma-Aldrich
Chlorure de sodium solution, BioUltra, for molecular biology, ~5 M in H2O
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Sigma-Aldrich
Chlorure de sodium, 99.999% trace metals basis
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Sigma-Aldrich
Chlorure de sodium, BioUltra, for molecular biology, ≥99.5% (AT)
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Sigma-Aldrich
Chlorure de magnésium solution, BioUltra, for molecular biology, 2 M in H2O
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Sigma-Aldrich
Chlorure de magnésium, BioReagent, suitable for insect cell culture, ≥97.0%
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Sigma-Aldrich
Hydroxyde de sodium, BioUltra, for luminescence, ≥98.0% (T), pellets
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Sigma-Aldrich
Ethylenediaminetetraacetic acid, ACS reagent, 99.4-100.6%, powder
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Sigma-Aldrich
Chlorure de magnésium solution, PCR Reagent, 25 mM MgCI2 solution for PCR
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Sigma-Aldrich
Hydroxyde de sodium, ultra dry, powder or crystals, 99.99% trace metals basis
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Sigma-Aldrich
L-Glutathion réduit, ≥98.0%
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Sigma-Aldrich
Chlorure de magnésium, AnhydroBeads, −10 mesh, 99.9% trace metals basis
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Sigma-Aldrich
Chlorure de sodium, BioXtra, ≥99.5% (AT)
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Sigma-Aldrich
Chlorure de sodium, BioPerformance Certified, ≥99% (titration), suitable for insect cell culture, suitable for plant cell culture
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Sigma-Aldrich
Chlorure de sodium, AnhydroBeads, −10 mesh, 99.999% trace metals basis
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Sigma-Aldrich
Sodium chloride-35Cl, 99 atom % 35Cl
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