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  • Structure-Function Analyses of the Interactions between Rab11 and Rab14 Small GTPases with Their Shared Effector Rab Coupling Protein (RCP).

Structure-Function Analyses of the Interactions between Rab11 and Rab14 Small GTPases with Their Shared Effector Rab Coupling Protein (RCP).

The Journal of biological chemistry (2015-06-03)
Patrick Lall, Andrew J Lindsay, Sara Hanscom, Tea Kecman, Elizabeth S Taglauer, Una M McVeigh, Edward Franklin, Mary W McCaffrey, Amir R Khan
RÉSUMÉ

Rab GTPases recruit effector proteins, via their GTP-dependent switch regions, to distinct subcellular compartments. Rab11 and Rab25 are closely related small GTPases that bind to common effectors termed the Rab11 family of interacting proteins (FIPs). The FIPs are organized into two subclasses (class I and class II) based on sequence and domain organization, and both subclasses contain a highly conserved Rab-binding domain at their C termini. Yeast two-hybrid and biochemical studies have revealed that the more distantly related Rab14 also interacts with class I FIPs. Here, we perform detailed structural, thermodynamic, and cellular analyses of the interactions between Rab14 and one of the class I FIPs, the Rab-coupling protein (RCP), to clarify the molecular aspects of the interaction. We find that Rab14 indeed binds to RCP, albeit with reduced affinity relative to conventional Rab11-FIP and Rab25-FIP complexes. However, in vivo, Rab11 recruits RCP onto biological membranes. Furthermore, biophysical analyses reveal a noncanonical 1:2 stoichiometry between Rab14-RCP in dilute solutions, in contrast to Rab11/25 complexes. The structure of Rab14-RCP reveals that Rab14 interacts with the canonical Rab-binding domain and also provides insight into the unusual properties of the complex. Finally, we show that both the Rab coupling protein and Rab14 function in neuritogenesis.

MATÉRIAUX
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Description du produit

Sigma-Aldrich
Imidazole, ReagentPlus®, 99%
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Sigma-Aldrich
Chlorure de sodium, for molecular biology, DNase, RNase, and protease, none detected, ≥99% (titration)
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Sigma-Aldrich
Chlorure de magnésium solution, for molecular biology, 1.00 M±0.01 M
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Sigma-Aldrich
Chlorure de magnésium, anhydrous, ≥98%
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Sigma-Aldrich
DL-Dithiothréitol solution, BioUltra, for molecular biology, ~1 M in H2O
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Supelco
DL-Dithiothréitol solution, 1 M in H2O
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Sigma-Aldrich
Chlorure de sodium solution, 0.9% in water, BioXtra, suitable for cell culture
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Sigma-Aldrich
Chlorure de sodium solution, 5 M in H2O, BioReagent, for molecular biology, suitable for cell culture
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Sigma-Aldrich
Fluorure de phénylméthanesulfonyle, ≥98.5% (GC)
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Sigma-Aldrich
Chlorure de sodium, BioReagent, suitable for cell culture, suitable for insect cell culture, suitable for plant cell culture, ≥99%
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Sigma-Aldrich
Imidazole, for molecular biology, ≥99% (titration)
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SAFC
Chlorure de sodium solution, 5 M
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Sigma-Aldrich
Acide éthylènediaminetétraacétique solution, 0.02% in DPBS (0.5 mM), sterile-filtered, BioReagent, suitable for cell culture
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Sigma-Aldrich
Solution tampon d′imidazole, BioUltra, 1 M in H2O
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Sigma-Aldrich
Chlorure de magnésium, powder, <200 μm
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Sigma-Aldrich
Ethylenediaminetetraacetic acid, anhydrous, crystalline, BioReagent, suitable for cell culture
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Sigma-Aldrich
Imidazole, BioUltra, ≥99.5% (GC)
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Sigma-Aldrich
Ethylenediaminetetraacetic acid, 99.995% trace metals basis
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Prix
Quantité
Sigma-Aldrich
Chlorure de sodium solution, BioUltra, for molecular biology, ~5 M in H2O
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Sigma-Aldrich
Chlorure de sodium, 99.999% trace metals basis
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Sigma-Aldrich
Fluorure de phénylméthanesulfonyle, ≥99.0% (T)
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Prix
Quantité
Sigma-Aldrich
Chlorure de sodium, BioUltra, for molecular biology, ≥99.5% (AT)
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Prix
Quantité
Sigma-Aldrich
Chlorure de magnésium solution, BioUltra, for molecular biology, 2 M in H2O
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Sigma-Aldrich
Chlorure de magnésium, BioReagent, suitable for insect cell culture, ≥97.0%
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Sigma-Aldrich
Ethylenediaminetetraacetic acid, ACS reagent, 99.4-100.6%, powder
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Quantité
Sigma-Aldrich
Chlorure de magnésium solution, PCR Reagent, 25 mM MgCI2 solution for PCR
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Quantité
Sigma-Aldrich
Chlorure de magnésium, AnhydroBeads, −10 mesh, 99.9% trace metals basis
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Quantité
Sigma-Aldrich
Chlorure de sodium, BioXtra, ≥99.5% (AT)
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Prix
Quantité
Sigma-Aldrich
Imidazole, ACS reagent, ≥99% (titration)
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Quantité
Sigma-Aldrich
Imidazole, ≥99% (titration), crystalline
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