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Robust ReadyMix à démarrage à chaud KAPA2G

2 × ( contains 2 mM MgCl₂ at 1×)

• Synonyme(s) : PCR, PCR à démarrage à chaud
• Code UNSPSC : 41106300
• Nomenclature NACRES : NA.55

Propriétés

• Utilisation: sufficient for 100 reactions; sufficient for 500 reactions
• Niveau de qualité: 100
• Durée de conservation: ≤12 mo.
• Caractéristiques: Difficult Templates/Specialty Enzymes PCR; dNTPs included; hotstart
• Conditionnement: kit of 1.25 mL (100 x 25 μL rxn; KK5701); kit of 6.25 mL (500 x 25 μL rxn; KK5702)
• Fabricant/nom de marque: Roche
• Concentration: 2 × ( contains 2 mM MgCl₂ at 1×)
• Technique(s): PCR: suitable
• Entrée: crude DNA
• Température de stockage: −20°C

Description

Description générale

L'ADN polymérase pour PCR robuste KAPA2G de deuxième génération a été modifiée pour améliorer l'homogénéité des amplifications sur un large éventail de types d'amplicons (riches en GC et en AT). Le mélange pour PCR robuste à démarrage à chaud KAPA2G Robust HotStart^® ReadyMix^™ assure une meilleure processivité et une plus grande activité spécifique, ce qui se traduit par des PCR robustes, une haute sensibilité et une plus grande tolérance aux inhibiteurs classiques. Les hautes performances de l'ADN polymérase KAPA2G Robust en font l'enzyme idéale pour les applications de PCR complexes et les échantillons difficiles, permettant de s'affranchir d'une optimisation impliquant de multiples protocoles et enzymes.

Application

Le mélange pour PCR robuste à démarrage à chaud KAPA2G Robust HotStart^® ReadyMix^™ a été utilisé dans les applications suivantes :

• amplification de matrices riches en GC ou en AT
• amplification de matrices contenant des inhibiteurs de PCR classiques (p. ex. sels, urée, SDS ou éthanol)
• PCR d'échantillons bruts (p. ex. frottis buccaux, cultures de cellules de mammifères, de levures ou de bactéries)
• PCR sur colonies
• extraction et amplification d'ADN
• criblage de mutations
• amplification par PCR méthylation-spécifique
• génotypage-PCR
• séquençage par PCR

Actions biochimiques/physiologiques

Les fragments d'ADN produits avec l'ADN polymérase KAPA2G Robust HotStart^® présentent les mêmes caractéristiques que ceux produits avec la Taq polymérase sauvage ; ils peuvent être utilisés pour des applications ou des analyses de routine en aval, dont la digestion par enzymes de restriction, le clonage et le séquençage. Comme la Taq polymérase sauvage, le mélange KAPA2G Robust HotStart présente une activité polymérase 5'→3' et une activité exonucléase 5'→3', mais il ne possède pas d'activité exonucléase 3'→5' (correctrice). La fidélité du mélange KAPA2G Robust HotStart® est comparable à celle de la Taq polymérase sauvage ; son taux d'erreurs est d'environ 1 erreur pour 1,7 × 105 nucléotides incorporés. Les produits de PCR obtenus avec le mélange KAPA2G Robust HotStart® comportent une queue 3'-dA et peuvent être clonés dans des vecteurs de clonage de type TA.

Caractéristiques et avantages

Amplification efficace des composés cibles riches en GC et en AT

• Performances robustes sur une large gamme de matrices riches en GC et en AT.
• Taux de succès en PCR accrus.

Amélioration de la tolérance aux inhibiteurs de PCR courants

• Amplification efficace des échantillons bruts.
• Rendement et sensibilité par unité d′enzyme accrus.

Performances inégalées en PCR sur colonie

• Rendement supérieur et répétabilité améliorée pour les PCR réalisées directement sur les cellules d′E. coli et de levure.

Remarques :

• Les Kits de PCR Robust ReadyMix à démarrage à chaud KAPA2G contiennent de l′ADN polymérase Robust KAPA2G, modifiée pour garantir une capacité de traitement élevée et une grande tolérance aux inhibiteurs.
• Il est possible d′utiliser à la fois de l′ADN génomique purifié et des échantillons bruts (par exemple PCR sur colonie) comme matrice.
• Rallonger le temps de 15 s/kb pour chaque cycle, et monter jusqu′à 30-60 s/kb avec les amplicons ou les matrices difficiles.
• Le Kit Robust ReadyMix à démarrage à chaud KAPA2G contient du MgCl₂ 1X 2 mM.
• Le Kit Robust ReadyMix à démarrage à chaud KAPA2G avec colorant contient deux colorants de traçage inertes permettant un chargement direct sur des gels d′agarose.
• Le Kit Robust ReadyMix à démarrage à chaud KAPA2G est idéal pour la PCR à protocole unique, c′est-à-dire l′amplification de fragments contenant de 25 à 65 % de GC et jusqu′à 1 kb de longueur en une seule réaction et selon un seul protocole de cyclage.
• Les produits de réaction ont une extrémité 3′-dA et peuvent être clonés sous forme de vecteurs de clonage TA.

Qualité

Chaque lot d′ADN polymérase Robust à démarrage à chaud KAPA2G est confirmé contenir < 2 % de protéine contaminante (Test protéique 230 d′Agilent). Les Kits Robust ReadyMix à démarrage à chaud KAPA2G sont soumis à des tests de contrôle qualité exigeants, ne présentent aucune activité endonucléase/exonucléase contaminante et répondent à des critères stricts en matière de niveaux de contamination par l'ADN.

Notes préparatoires

Assurez-vous toujours que le produit soit complètement décongelé et mélangé avant emploi. Les réactifs peuvent être stockés à 4 °C pour une utilisation à court terme (jusqu'à 1 mois). Pour un stockage à long terme, replacez-les à -20 °C. Si tous les constituants ont été manipulés avec les soins nécessaires et sont exempts de contaminations, le kit ne devrait pas être affecté s′il est laissé accidentellement à température ambiante pendant une courte durée (3 jours maximum). Il n′est pas recommandé de conserver le kit à température ambiante ou à 4 °C sur le long terme. Il est à noter que les réactifs stockés à une température supérieure à -20 °C ont plus tendance à se dégrader lorsqu′ils sont contaminés durant leur utilisation ; tout stockage dans ces conditions est donc de la seule responsabilité de l′utilisateur.

Autres remarques

Produit réservé aux activités de recherche. Ne pas utiliser dans des procédures de diagnostic.

Informations légales

HOTSTART is a registered trademark of Molecular BioProducts, Inc.

ReadyMix is a trademark of Sigma-Aldrich Co. LLC

Composants de kit seuls

• KAPA2G Robust HotStart^® DNA Polymerase 1U per 25 µL reaction
• MgCl₂ 2mM at 1X
• dNTP Mix 0.2 mM of each dNTP at 1X

Informations sur la sécurité

• Pictogrammes: GHS07,GHS08
• Mention d'avertissement: Warning
• Mentions de danger: H302,H371
• Conseils de prudence: P260 - P264 - P270 - P301 + P312 + P330 - P308 + P311 - P501
• Classification des risques: Acute Tox. 4 Oral - STOT SE 2
• Code de la classe de stockage: 12 - Non Combustible Liquids
• Classe de danger pour l'eau (WGK): WGK 1
• Point d'éclair (°F): does not flash
• Point d'éclair (°C): does not flash