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Merck

Identifying catalytic residues in CPAF, a Chlamydia-secreted protease.

Archives of biochemistry and biophysics (2009-04-24)
Ding Chen, Jijie Chai, P John Hart, Guangming Zhong
ZUSAMMENFASSUNG

A secreted chlamydial protease designated CPAF (Chlamydial Protease/proteasome-like Activity Factor) degrades host proteins, enabling Chlamydia to evade host defenses and replicate. The mechanistic details of CPAF action, however, remain obscure. We used a computational approach to search the protein databank for structures that are compatible with the CPAF amino acid sequence. The results reveal that CPAF possesses a fold similar to that of the catalytic domains of the tricorn protease from Thermoplasma acidophilum,and that CPAF residues H105, S499, and E558 are structurally analogous to the tricorn protease catalytic triad residues H746, S965, and D1023. Substitution of these putative CPAF catalytic residues blocked CPAF from degrading substrates in vitro, while the wild type and a noncatalytic control mutant of CPAF remained cleavage-competent. Substrate cleavage is also correlated with processing of CPAF into N-terminal (CPAFn) and C-terminal (CPAFc) fragments, suggesting that these putative catalytic residues may also be required for CPAF maturation.

MATERIALIEN
Produktnummer
Marke
Produktbeschreibung

Sigma-Aldrich
Phenylmethansulfonylfluorid, ≥98.5% (GC)
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Sigma-Aldrich
Aprotinin aus Rinderlunge, saline solution, 3-7 TIU/mg protein
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Sigma-Aldrich
Leupeptin, microbial, ≥90% (HPLC)
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Sigma-Aldrich
Pepstatin A, microbial, ≥90% (HPLC)
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Sigma-Aldrich
Monoclonal Anti-Cytokeratin Peptide 8 antibody produced in mouse, clone M20, ascites fluid
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