C7657
Collagenase aus Clostridium histolyticum
Type XI, 2-5 FALGPA units/mg solid, ≥800 CDU/mg solid
Synonym(e):
Clostridiopeptidase A
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About This Item
Empfohlene Produkte
Biologische Quelle
Clostridium histolyticum
Qualitätsniveau
Form
powder
Spezifische Aktivität
≥800 CDU/mg solid
2-5 FALGPA units/mg solid
Mol-Gew.
68-130 kDa
Löslichkeit
TESCA buffer (50 mM TES, 0.36 mM Calcium chloride, pH 7.4): soluble 0.05-0.1 mg/mL at 37 °C
Anwendung(en)
diagnostic assay manufacturing
Lagertemp.
−20°C
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Anwendung
Clostridiopeptidase A wurde in einer Studie eingesetzt, bei der eine quantitative Methode zur Beurteilung kleiner Kollagenmengen auf Basis der MALDI-TOF-Massenspektrometrie (MS) im Anschluss an den Kollagenaufschluss beschrieben wurde (MALDI-TOF = Kombination der matrix-assistierten Laser-Desorption/Ionisierung mit der Flugzeitanalyse).
Dieses Produkt wird bei der Isolierung von duktalen Pankreasadenokarzinom (PDAC)-Zelllinien und der Gewebekultur von pankreatischen Fibroblasten eingesetzt.
Biochem./physiol. Wirkung
Eine wirksame Freisetzung von Zellen aus dem Gewebe erfordert die Wirkung von Kollagenase-Enzymen und der neutralen Protease. Kollagenase wird durch vier Grammatom Calcium (Ca2+) pro Mol Enzym aktiviert. Es wird davon ausgegangen, dass das Kulturfiltrat mindestens 7 verschiedene Proteasen mit einer Molekülmasse von 68-130 kDa enthält. Der optimale pH-Wert beträgt 6,3-8,8. Das Enzym wird üblicherweise zum Aufschluss von Bindegewebekomponenten in Gewebeproben verwendet, um einzelne Zellen freizusetzen. Die Kollagenase-Behandlung kann dazu führen, dass einige Zellen absterben. Üblicherweise werden Konzentrationen von 0,1 bis 5 mg/ml für den Aufschluss verwendet. Die Dauer der Reaktion variiert von 15 Minuten bis zu mehreren Stunden und führt zu einer zufriedenstellenden Effizienz der Zelldissoziation, ohne zu viele Zellen absterben zu lassen. Krebs-Ringer-Puffer mit Calcium und BSA wird bevorzugt und Zn2+ wird für die Aktivität benötigt.
Collagenase wird durch vier Grammatom Calcium pro Mol Enzym aktiviert. Sie wird durch Ethylenglycol-bis-(beta-aminoethylether)-N, N, N′,N′-tetraessigsäure, β-Mercaptoethanol, Glutathion, Thioglycolsäure und 8-Hydroxychinolin gehemmt.
Qualität
Enthält außerdem Clostripain, unspezifische neutrale Protease und tryptische Aktivitäten.
Einheitendefinition
Eine Collagen-Aufschlusseinheit (Collagen Digestion Unit, CDU) setzt Peptide aus Rinder-Achillessehnencollagen entsprechend der Ninhydrin-Anfärbung von 1,0 μmol Leucin in 5 Stunden bei pH 7,4 und 37 °C in Gegenwart von Calciumionen frei. Eine FALGPA-Hydrolyseeinheit hydrolysiert 1,0 μmol Furylacryloyl-Leu-Gly-Pro-Ala pro Minute bei 25 °C. Eine neutrale Protease-Einheit hydrolysiert die Caseinmenge, die eine Färbung entsprechend 1,0 μmol Tyrosin pro 5 Stunden bei pH 7,5 und 37 °C produziert. Eine Clostripain-Einheit hydrolysiert 1,0 μmol BAEE pro Minute bei pH 7,6 und 25 °C in Gegenwart von DTT.
Angaben zur Herstellung
Eine Stammlösung kann durch das Auflösen von 0,05 - 0,1 mg/ml Kollagenase bei 37 °C in 50-mM-TES-Puffer, der 0,36 mM Calciumchlorid (TESCA) mit einem pH-Wert von 7,4 enthält, hergestellt werden.
Substrat
Produkt-Nr.
Beschreibung
Preisangaben
Signalwort
Danger
H-Sätze
Gefahreneinstufungen
Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
Zielorgane
Respiratory system
Lagerklassenschlüssel
11 - Combustible Solids
WGK
WGK 1
Flammpunkt (°F)
Not applicable
Flammpunkt (°C)
Not applicable
Persönliche Schutzausrüstung
dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves
Analysenzertifikate (COA)
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