MAB369

Anti-Dopamin-Transporter-Antikörper, NT, Klon DAT-Nt

culture supernatant, clone DAT-Nt, Chemicon^®

• Synonym(e): DAT
• UNSPSC-Code: 12352203
• eCl@ss: 32160702
• NACRES: NA.41

Eigenschaften

• Biologische Quelle: rat
• Qualitätsniveau: 100
• Antikörperform: culture supernatant
• Antikörper-Produkttyp: primary antibodies
• Klon: DAT-Nt, monoclonal
• Speziesreaktivität: rat, human, mouse, monkey
• Hersteller/Markenname: Chemicon^®
• Methode(n): immunocytochemistry: suitable; immunohistochemistry: suitable; western blot: suitable
• Isotyp: IgG2aκ
• NCBI-Hinterlegungsnummer: NM_001044.3
• UniProt-Hinterlegungsnummer: Q01959
• Versandbedingung: dry ice
• Posttranslationale Modifikation Target: unmodified
• Angaben zum Gen: human ... SLC6A3(6531)

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

Der Transmembran-Dopamintransporter (DAT) befindet sich am präsynaptischen Nervenende und ist für die Beendigung der dopaminergen Transmission verantwortlich, indem Dopamin von der Synapsenspalte in das dopaminerge Neuron (Wiederaufnahme) transportiert wird. Dopaminerge Bahnen stehen in engem Zusammenhang mit Belohnung und Sucht, Motivation, Alkoholismus, ADHS und degenerativen motorischen Erkrankungen wie Parkinson und Chorea Huntington.

Spezifität

Erkennt den N-Terminus des Dopamintransporters. Zeigt keine Kreuzreaktivität mit dem eng verwandten Serotonin- und Norepinephrin-Transporter (Miller, 1997). Die Immunlokalisation von DAT auf Paraformaldehyd-fixierten gefrorenen Menschenhirn-Gewebeschnitten unter Verwendung von MAB369 zeigt eine dichte punktierte Färbung über die gesamte Fläche von Nucleus caudatus, Putamen und Nucleus accumbens (Miller, 1997).

Immunogen

Epitop: N-Terminus

N-Terminus des humanen Dopamintransporters fusioniert mit Glutathion-S-Transferase.

Anwendung

Dieser Anti-Dopamin-Transporter-Antikörper, N-Terminus, Klon DAT-Nt ist zur Verwendung bei IC, IH, WB für die Detektion des Dopamintransporters validiert.

Forschungskategorie
Neurowissenschaft

Forschungsunterkategorie
Ionenkanäle & Transporter

Western Blot: Erkennt bei ca. 70–85 kDa eine diffuse Bande auf Western Blots von Extrakten (20 μg Gesamtprotein) aus dem humanen Nucleus caudatus, Putamen und Nucleus accumbens.

Immunhistochemie: In 4 % Paraformaldehyd fixiertes Gewebe (vorsichtig vorgehen, um eine Überfixierung des Gewebes zu vermeiden); Perfusion maximal 90 Minuten nach der Fixierung, mit anschließender Kryoprotektion. Empfohlene Arbeitsverdünnung: 1:1.000 - 1:10.000. Bei Verwendung mit Rattengewebe werden absorbierte Anti-Ratte Sekundärantikörper sowie die Verwendung von Ratten-PAP-Systemen empfohlen, da der ABC-Nachweis die Sensitivität anderenfalls erhöht.

Immunzytochemie: 1:5.000 bis 1:10.000.

Immunblotting (bei Ratten nicht empfohlen)

Optimale Arbeitsverdünnungen und -protokolle müssen vom Anwender bestimmt werden.



IMMUNOHISTOCHEMIE-PROTOKOLL FÜR MAB369

Dieser Antikörper wurde erfolgreich bei 30 μm, freischwebenden, in 4 % Paraformaldehyd fixierten Gehirngewebeschnitten von Mäusen verwendet. Alle Schritte werden unter konstantem Rühren durchgeführt. Im Folgenden ist das empfohlene Protokoll aufgeführt.

1) 3 Waschvorgänge von 10 Minuten in TBS (mit oder ohne 0,25 % Triton).

2) 30 Minuten in TBS mit 3 % Serum (vom gleichen Wirt wie der Sekundärantikörper) inkubieren.

3) Den ordnungsgemäß in TBS mit 1 % Serum (vom gleichen Wirt wie der Sekundärantikörper) verdünnten Primärantikörper (mit oder ohne 0,25 % Triton) 2 Stunden bei Raumtemperatur und anschließend 16 Stunden bei 4 °C inkubieren.

4) 3 Waschvorgänge von 10 Minuten in TBS.

5) Mit dem ordnungsgemäß in TBS mit 1 % Serum (vom gleichen Wirt wie der Sekundärantikörper) verdünntem Sekundärantikörper inkubieren.

6) 3 Waschvorgänge von 10 Minuten in TBS.

7) ABC Elite (1:200 Vector Labs) in TBS.

8) 2 Waschvorgänge von 10 Minuten in TBS.

9) 1 Waschvorgang von 10 Minuten in Phosphatpuffer (keine Kochsalzlösung)

10) DAB-Reaktion mit zur Intensivierung zugegebenem 0,06 % NiCl.

11) 2 Waschvorgänge von 10 Minuten in PBS.

12) 1 Waschvorgang von 10 Minuten in Phosphatpuffer (keine Kochsalzlösung)

Zielbeschreibung

~ 70–85 kDa

Physikalische Form

Nicht aufgereinigt

Nicht aufgereinigter Gewebekulturüberstand, der vor der Abfüllung in Fläschchen durch eine 0,2-μm-Membran gefiltert wird. Das Produkt enthält 20 %FBS und Ciprofloxacin in einer Endkonzentration von 10 μg/ml.

Lagerung und Haltbarkeit

Bei -20 °C 1 Jahr ab Versanddatum haltbar. Aliquotieren, um wiederholtes Einfrieren und Auftauen zu vermeiden. Für maximale Produktrückgewinnung das Originalfläschchen nach dem Auftauen und vor dem Abnehmen der Kappe zentrifugieren.

Hinweis zur Analyse

Kontrolle
Positivkontrolle: Gehirngewebe (Nucleus caudatus, Putamen und Nucleus accumbens)

Sonstige Hinweise

Gewinner des CiteAb Award 2024 in der Kategorie „Supplier Succeeding in Parkinson′s Research“ (Erfolgreiche Anbieter in der Parkinson-Forschung)

Rechtliche Hinweise

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Haftungsausschluss

Sofern in unserem Katalog oder anderen Begleitdokumenten unserer Produkte nicht anders angegeben, sind unsere Produkte nur für Forschungszwecke vorgesehen und nicht für andere Zwecke zu verwenden, einschließlich, jedoch nicht beschränkt auf unautorisierte kommerzielle Verwendung, zur In-vitro-Diagnostik, für Ex-vivo- oder In-vivo-Therapiezwecke oder jegliche Art der Einnahme oder Anwendung bei Menschen oder Tieren.

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