ES001

TMB/E Einzelreagenz, blaue Farbe, Meerrettichperoxidase-Substrat (löslich)

500 ml TMB/E Single Reagent, Blue color, Horseradish Peroxidase Substrate (soluble) for ELISA.

• Synonym(e): HRP substrate, TMB
• UNSPSC Code: 41116010
• NACRES: NB.22
• eCl@ss: 42029053

Eigenschaften

• form: liquid
• manufacturer/tradename: Chemicon^®
• technique(s): ELISA: suitable
• λmax: 450 nm
• shipped in: wet ice

Beschreibung

General description

TMB, (3,3′,5,5′-Tetramethylbenzidin) hat sich als sicheres, sensitives Substrat für die Bestimmung von HRP erwiesen. Zunächst wird bei Anwesenheit von HRP und Wasserstoffperoxid ein Ein-Elektronen-Oxidationsprodukt gebildet. Diese Verbindung ist ein blaues kationenfreies Radikal mit Absorptionsmaximum bei 653 nm. Eine fortgesetzte Reaktion mit HRP/H2O2 oder die Versauerung des Radikals mit Säure ergibt das endständige Oxidationsprodukt Diimin, das Licht bei 450 nm absorbiert. Der Extinktionskoeffizient des Radikals (E653 nm = 3,9 x 104 mol-1 cm-1) und des Diimins (E450 nm = 5,9 x 104 mol-1 cm-1) bieten ein bemerkenswert empfindliches System zur Bestimmung von HRP und HRP-markierten Sonden. ES001 ist ein bei Raumtemperatur stabiles Einkomponenten-Reagenz und nicht lichtempfindlich gegenüber normalem Laborlicht. Es ist für TMB- und Wasserstoffperoxid-Konzentrationen optimiert und weist eine lineare Reaktion bei HRP-Konzentrationen auf, die normalerweise in immunologischen Assays eingesetzt werden.

Application

METHODENSYNOPSE:

Nach der Bindung des Analyten an eine Festphase und die Reaktion mit einer HRP-markierten Sonde abgeschlossen ist, wird ES001 zugegeben. Die Oxidation von TMB erzeugt ein blaues Reaktionsprodukt, das bei 650 nm gemessen werden kann. Die Farbbildung kann als Funktion der Zeit erfasst oder die Reaktion nach einem festgelegten Intervall mit Natriumfluorid gestoppt werden. Eine höhere Empfindlichkeit kann durch Umwandlung des blauen Radikals in Diimin durch Säurezugabe erreicht werden. Die daraus resultierende gelbe Farbe wird unverzüglich bei 450 nm gemessen.

PROBENAHME-VERFAHREN

1. Führen Sie alle erforderlichen Inkubationen mit Antikörpern, Sonden, HRP-markierten Reagenzien durch.

2. Spülen Sie die Platte mindestens 4 Mal mit PBS oder Tris-gepufferter Kochsalzlösung, die 0,1 % Tween-20 enthält.

3. Nach dem letzten Spülen den restlichen Puffer von den Plattenwells schütteln und abtupfen.

4. 0,1 mL ES001 (TMBE-Lösung) in den zutreffenden Wells zugeben und 5–30 Minuten inkubieren.

Hinweis: Die Reaktionszeit hängt von der Aktivität der HRP-Sonde ab. Wenn die Farbe sich zu schnell entwickelt, hat die Eliminationskinetik nullter Ordnung keinen Bestand. Eine Verdünnung der Sonde, des Antikörpers oder des HRP-markierten Reagenzes kann erforderlich sein.

5. Die Reaktion kann in kinetischen Assays als Funktion der Zeit überwacht oder mit 0,1 mL Natriumfluorid gestoppt und bei 650 nm gemessen werden.

6. Wenn das Verfahren die Umwandlung in gelbes Diimin vorschreibt, sind 0,1 mL einer der Säuren zuzugeben, die oben im Abschnitt der Reagenzien beschrieben wurden, und die Extinktion ist innerhalb von 5 Minuten zu erfassen.

Abweichungen bei Zeit, Reagenzvolumen und Temperatur erfordern Standardisierung durch den Benutzer.

Physical form

ALS REAGENZ BEREITGESTELLT:
Flüssige Lösung mit TMB, 1,25 mMol/L, Wasserstoffperoxid, 2,21 mMol/L sowie weniger als 1 % Dimethylsulfoxid in 0,08 Mol/L Acetatpuffer (bei pH 4,9). Enthält auch proprietäre ungiftige Stabilisatoren.

Erforderliche Materialien:
Erforderliche, jedoch nicht im Lieferumfang enthaltene Reagenzien, um die Reaktion zu stoppen
A. Natriumfluorid, 0,1 %, um die Reaktion zu stoppen und blaues Chromogen zu erhalten. Herzustellen durch Auflösen von 1 g Natriumfluorid in 1 Liter analysenreines Wasser. Alle auf dem Etikett genannten Vorsichtsmaßnahme für Natriumfluorid beachten.

B. Säure, um die Reaktion zu stoppen und das blaue Radikal in gelbes Diimin umzuwandeln. Es kann entweder Schwefelsäure 0,5 Mol/L oder Salzsäure 0,25 Mol/L verwendet werden. DIE EXTINKTION MUSS INNERHALB VON 5 MINUTEN NACH ZUGABE DER SÄURE ERREICHT WERDEN.
Hinweis: Analysenreines Wasser muss weniger als 10^-7 Mol/L Eisen- oder Kupfersalze enthalten, andernfalls wird nicht umgesetztes TMB enzymatisch zu Diimin umgewandelt.

Farbcode: Gelb

Preparation Note

Kann bei Raumtemperatur bis zu 6 Monate aufbewahrt werden. Zur langfristigen Lagerung bis zu zwölf Monaten bei 2–8 °C aufbewahren. Vor direkte Sonneneinstrahlung schützen. Blaue oder trübe Lösung ist zu verwerfen.

Legal Information

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Disclaimer

Sofern in unserem Katalog oder anderen Begleitdokumenten unserer Produkte nicht anders angegeben, sind unsere Produkte nur für Forschungszwecke vorgesehen und nicht für andere Zwecke zu verwenden, einschließlich, jedoch nicht beschränkt auf unautorisierte kommerzielle Verwendung, zur In-vitro-Diagnostik, für Ex-vivo- oder In-vivo-Therapiezwecke oder jegliche Art der Einnahme oder Anwendung bei Menschen oder Tieren.

Sicherheitshinweise

• Lagerklasse: 12 - Non Combustible Liquids
• wgk: WGK 2