UV/VIS Spectroscopy에 의한 인지질 산화의 측정 - Avanti^® 극성 지질

정의

인지질 산화의 퍼센트는 Beer 법칙을 사용하여 234 nm에서의 흡광도로부터 과산화된 인지질 농도 계산하여 알아낼 수 있습니다.

범위

모든 불포화 인지질에 적용 가능.

장치

• UV/VIS 분광광도계
• HELLMA UV 석영 시료 셀(QS 1.000)
• Kimwipes
• 일회용 유리관

시약

• Ethanol (200 proof, dehydrated USP)
• 탈이온수
• 16:0 PC (DPPC)

절차

1. DPPC 시료 조제. 1mg/mL DPPC 용액 최소 3 mL를 ethanol/DI water(9:1)에 용해시켜 조제합니다.
2. 시료 조제. 1mg/mL 인지질 시료 용액 최소 3 mL를 ethanol/DI water(9:1)에 용해시켜 조제합니다.
3. Blank를 측정합니다. blank(바탕)는 인지질 시료를 용해하는 용매입니다.
   • 시료 셀을 용매로 3번 세척하여 셀에서 모든 잔류 오염물질을 제거합니다.
   • 시료 셀에 참조용액을 3/4만큼 채웁니다.
   • Kimwipe로 시료 바깥에 묻은 지문과 오염을 닦아냅니다.
   • 시료 셀을 분광광도계에 삽입하고 blank 스펙트럼을 시행합니다.
4. DPPC 시료를 측정합니다.
   • 시료 셀에서 blank 용매를 따라냅니다.
   • 시료 셀을 DPPC 시료용액으로 3/4만큼 채웁니다.
   • 시료 셀 바깥에 묻은 지문을 제거합니다.
   • 시료 셀을 분광광도계에 삽입하고 DPPC 스펙트럼을 시행합니다.
5. 시료를 측정합니다.
   • 시료 셀에서 DPPC 용매를 따라냅니다.
   • 시료 셀을 용매로 3번 세척하여 셀에서 모든 잔류 DPPC를 제거합니다.
   • 시료 셀을 인지질 시료로 3/4만큼 채웁니다.
   • 시료 셀 바깥에 묻은 지문을 제거합니다. 시료 셀을 분광광도계에 삽입하고 시료 스펙트럼을 시행합니다.
   • DPPC 스펙트럼을 시료 스펙트럼에서 감산하고 234 nm에서 인지질 시료의 흡광도 판독 값(OD)을 기록합니다.

계산

과산화된 지질 농도 (D) = A/(B*C)
A = 234 nm에서 흡광도 판독 값 (OD)
B = 흡광계수 (OD*mL)/(mmol*cm) (과산화된 지질에 대해 27,000)
C =cm 단위의 광로 길이 산화 퍼센트 = D/E * 100
D = 과산화된 지질의 농도 mg/mL
E = 지질 시료 농도 = 1.0 mg/mL

참고문헌

1. Kim R, LaBella F. 1987. Comparison of analytical methods for monitoring autoxidation profiles of authentic lipids. J. Lipid Res. 28:1110-1117.