xMAP® INTELLIFLEX® 시스템을 이용한 다중 검출
새로운 xMAP® INTELLIFLEX® 시스템을 이용한 MILLIPLEX® 분석의 호환성과 다른 xMAP® 플랫폼 전반에 걸친 다중 검출의 데이터 재현성에 대한 데모를 확인하세요. 자료 수집 시 INTELLIFLEX® 시스템의 Luminex® 200™ 모드를 켠 상태에서 Luminex® 200™ 시스템의 MILLIPLEX® 인간 사이토카인/케모카인/성장인자 패널 A를 측정했습니다.
xMAP® INTELLIFLEX® 플랫폼
새로운 xMAP® INTELLIFLEX® 플랫폼은 사용자에게 표준 레이저 출력에서 감지 하드웨어를 구성하는 데 도움이 되는 4가지 모드를 선택할 수 있는 유연성을 제공하고 연구원에게 "낮은 PMT" 또는 "높은 PMT"를 선택할 수 있는 보조 옵션을 제공합니다. 각 모드는 선택 시 생성되는 형광 수치가 Luminex® 기기(Luminex® 200™ 시스템 및 FLEXMAP 3D® 시스템)의 동일한 모드를 선택한 결과와 비슷하게 나오도록 설계되었습니다. 본 시험에서는 xMAP® INTELLIFLEX® 시스템의 Luminex® 200™ 모드(저PMT)를 사용해서 Luminex® 200™ 기기의 결과와 비교해 보았습니다. Luminex® 200™ 플랫폼은 Luminex® 200™ 기기, Luminex® XYP™ 플레이트 처리 플랫폼, Luminex® Sheath Fluid PLUS 전달 시스템, xPONENT® 소프트웨어, 개인용 컴퓨터(PC)로 구성되어 있습니다.
INTELLIFLEX® 플랫폼은 xMAP® INTELLIFLEX®-RUO 기기, Sheath Fluid PLUS, INTELLIFLEX® 기기 제어용 내장형 소프트웨어로 구성되어 있습니다. 마지막에 언급한 소프트웨어는 시스템에 사전 탑재된 상태로 제공되며, 기기의 일체형 PC로 작동시킬 수 있습니다. 이 INTELLIFLEX® 내장형 소프트웨어를 사용하면 xMAP® INTELLIFLEX® 기기를 작동하고 제어할 수 있습니다. 이 소프트웨어는 플레이트 설정, 실행 모니터링, 데이터 시각화 및 분석을 위한 데이터 전송을 지원합니다. 이 인터페이스는 직관적이며 자료 시각화 캐로셀로 실행 모니터링을 실시합니다. 시스템 사양은 표 1에 나와 있습니다.
| 기기 | xMAP® INTELLIFLEX® | xMAP® INTELLIFLEX®-DR-SE |
|---|---|---|
| 광학 하드웨어 | 레이저/APD/PMT | 레이저/APD/PMT |
| 기술 | 유량 기반 | 유량 기반 |
| 다중 처리량 | 최대 500 | 최대 500 |
| 검출 범위 | ≥5.5로그 | ≥5.5로그(RP1) ≥4.5로그(RP2) |
| 판독 시간 | 96웰 플레이트 ~20분 384웰 플레이트 ~75분 | 96웰 플레이트 ~20분 384웰 플레이트 ~75분 |
| 응용분야 | 단백질/핵산 | 단백질/핵산 |
| 자동화 호환 하드웨어 | 예(전면 토출 플레이트 활용) | 예(전면/측면 토출 플레이트 활용) |
| 리포터 레이저 | 532 nm(녹색) | 532 nm(녹색) 405 nm(보라색) |
| IQ/OQ | 예 | 예 |
| 21 CFR 규정 준수 | 예 | 예 |
| 자동화 | 예 | 예 |
| 자료 분석 | Belysa® 소프트웨어 | Belysa® 소프트웨어 |
| 플레이트 형태 | 96웰, 384웰 | 96웰, 384웰 |
| 규격(선형 탁상 공간, PC 포함) | 58.4 cm 너비(W) x 61 cm 깊이(D) x 76.2 cm 높이(H) | 58.4 cm 너비(W) x 61 cm 깊이(D) x 76.2 cm 높이(H) |
| 중량(분석기) | 54.4 kg (120 lbs) | 54.4 kg (120 lbs) |
| DR-SE = dual reporter side eject, 이중 리포터 측면 분리; RP = reporter, 리포터 | ||
본 시험에서는 MILLIPLEX® 인간 사이토카인/케모카인/성장인자 패널 A를 사용했습니다. 이는 48개의 개별 면역 인자에 대한 테스트를 결합한 다중 분석이며 사이토카인, 케모카인 및 성장 인자 연구에 사용할 수 있는 가장 다용도의 패널입니다. 또한 Luminex® 기술을 이용해서 인간 혈청 시료, 혈장 시료, 세포 배양 시료의 생체표지자를 최대 48개까지 동시에 분석할 수 있습니다.
방법
시료
정상 시료와 패혈증 시료를 사용하여 기저 상태 및 질병 상태와 관련 있는 농도 범위에 걸쳐 사이토카인 수치를 측정했습니다. 혈청 샘플의 경우 혈액을 최소 30분 동안 응고시킨 후 1000 x g에서 10분간 원심분리했습니다. 혈청을 제거하여 즉시 분석하거나 분취하여 -20°C 이하의 온도에서 보관했습니다. 냉동 시료는 입자가 제거되도록 사용 전에 완전히 해동시키고 볼텍싱한 다음 원심분리 했습니다.
면역분석 프로토콜
MILLIPLEX® 인간 사이토카인/케모카인/성장인자 패널 A(카탈로그 번호 HCYTA-60K-PX38) 전용 프로토콜에 따라 96웰 플레이트로 면역분석을 실시했습니다. 이 평가에는 RANTES가 포함되지 않았습니다.
당사의 Luminex® 다중 분석 기술 개요 페이지에서 MILLIPLEX® 다중 패널의 상세 정보를 확인하세요.
절차
하나의 96웰 플레이트를 표준, 품질 관리(QC), 건강한(n=7) 및 패혈증(n=7) 샘플 세트와 함께 모두 중복해서 사용했습니다. 이와 비슷한 방법으로 96웰 플레이트의 나머지 절반도 준비했습니다. 플레이트의 각 절반(48웰)을 Luminex® 200™ 시스템과 xMAP® INTELLIFLEX® 시스템으로 판독했습니다.
해당 패널을 대상으로 실시한 절차는 다음과 같습니다.
- 200 µL 세척 버퍼와 디캔트를 사용하여 96웰 플레이트를 미리 적십니다.
- 25 µL 표준품 또는 샘플(혈청, 혈장, 세포 배양 등)을 추가합니다.
- 분석용 버퍼 25 µL를 첨가합니다
- 비드(bead) 혼합물 25 µL를 첨가합니다
- 4°C에서 밤새 흔들어 주거나 실온에서 2시간 동안 흔들어줍니다.
- 세척용 버퍼로 비드를 세척합니다
- 검출용 항체 혼합물을 25 µL 첨가 후 실온에서 1시간 동안 흔들어줍니다
- SAPE 25 µL 첨가 후 실온에서 30분 동안 흔들어줍니다
- 세척용 버퍼로 비드를 세척합니다
- Sheath Fluid PLUS 150 µL 첨가 후 Luminex® 기기로 판독합니다
다중 검출 결과
MILLIPLEX® 인간 사이토카인/케모카인/성장인자 패널 A를 사용해서 정상 시료 및 패혈증 시료로부터 채취된 혈청의 사이토카인, 케모카인, 성장인자 수치들을 측정했습니다. IP-10, M-CSF, IL-15, MCP-1, IL-17E의 표준 곡선과 QC 자료는 그림 1 및 표 2에, 37개 분석물의 시료 자료는 그림 2에 나와 있습니다.
그림 1.5개 분석물의 표준 곡선은 Luminex® 200™(LX200) 시스템과 xMAP® INTELLIFLEX® 시스템 간의 재현성을 보여줍니다.
| 시스템 | Luminex® 200™ | xMAP® INTELLIFLEX® | ||
|---|---|---|---|---|
| QC1(pg/mL) | QC2(pg/mL) | QC1(pg/mL) | QC2(pg/mL) | |
| IP-10 | 90.0 | 678.1 | 86.5 | 546.8 |
| M-CSF | 2,148.3 | 1,0482.7 | 1,994.7 | 10,395.5 |
| IL-15 | 180.4 | 933.0 | 166.3 | 910.2 |
| MCP-1 | 172.0 | 773.3 | 158.6 | 739.0 |
| IL-17E | 2,261.9 | 10,188.0 | 2,142.6 | 10,333.0 |
그림 2.정상 혈청 시료와 패혈증 혈청 시료 양쪽에서 발생한 시료 농도 범위는 Luminex® 200™ 시스템과 INTELLIFLEX® 시스템 간에 비슷했습니다. 모든 분석물질의 수치가 패혈증 혈청 시료에서 상승했습니다.
요약
염증의 진행을 측정할 때 동일한 시료에서 동시에 여러 분석물질의 변화를 감지하는 것이 중요하며, 이는 제한 요소가 될 수 있습니다. MILLIPLEX® 인간 사이토카인/케모카인/성장인자 패널 A는 개별 면역인자를 동시에 최대 48개까지 검사하여 시료와 시간을 절약할 수 있게 해 주는 다중 분석입니다. 이 분석에 xMAP® 기술의 위력이 더해지면 연구원이 유의미한 고품질의 자료를 생성할 수 있는 유일무이한 솔루션이 탄생합니다. xMAP® INTELLIFLEX® 시스템은 유량 기반 플랫폼으로 더 폭넓은 검출 범위(리포터 1, RP1), 사용자 친화적인 인터페이스 등 첨단 기능들이 탑재되어 있습니다. 당사는 INTELLIFLEX® 시스템과 MILLIPLEX® 분석의 호환성과 다른 Luminex® 플랫폼 전반에 걸친 데이터 재현성을 입증했습니다.
재료
기기, 소프트웨어, 부속품
| 카탈로그 번호 | 제품 설명 |
|---|---|
| INTELLIFLEX-RUO | xMAP® INTELLIFLEX RUO |
| INTELLIFLEX-DRSE | xMAP® INTELLIFLEX DRSE |
| 40-092AB | BioTek® 405™ TS Magnetic 96-Well Washer Complete with Touch Screen and Ultrasonic Cleaning |
| 40-122 | Belysa® Immunoassay Curve Fitting Software |
| 40-50021 | xMAP® Sheath Fluid PLUS, 20L, RUO |
| 40-50023 | xMAP® Sheath Concentrate PLUS, 1 L |
| IFX-PVER-K20 | xMAP® INTELLIFLEX® Performance Verification Kit RUO, 20회분 |
| IFX-CAL-K20 | xMAP® INTELLIFLEX® Calibration Kit RUO, 20회분 |
| 카탈로그 번호 | 제품 설명 |
|---|---|
| HCYTA-60K | MILLIPLEX® 인간 사이토카인/케모카인/성장인자 패널 A |
| HCYTA-60K-PXBK48 | MILLIPLEX® 인간 사이토카인/케모카인/성장인자 패널 A 48개 사전 혼합-대용량 |
| HCYTA-60K-PXBK38 | MILLIPLEX® 인간 사이토카인/케모카인/성장인자 패널 A 38개 사전 혼합-대용량 |
| HCYTA-60K-PX48 | MILLIPLEX® 인간 사이토카인/케모카인/성장인자 패널 A 48개 사전 혼합 |
| HCYTA-60K-PX38 | MILLIPLEX® 인간 사이토카인/케모카인/성장인자 패널 A 38개 사전 혼합 |
| 카탈로그 번호 | 제품 설명 |
|---|---|
| IFLEX-PLATINUM | xMAP® INTELLIFLEX® 플래티넘 서비스 |
| IFLEX-GOLD | xMAP® INTELLIFLEX® 골드 서비스 |
| IFLEX-DRSE-PLAT | xMAP® INTELLIFLEX® DR-SE 플래티넘 서비스 |
| IFLEX-DRSE-GOLD | xMAP® INTELLIFLEX® DR-SE 골드 서비스 |
| IFLEX-IQOQ | xMAP® INTELLIFLEX® IQ/OQ 서비스(설치 포함) |
| IFLEX-OQ | xMAP® INTELLIFLEX® 연간 OQ 서비스 |
연구 목적 외 사용 금지. 진단 절차에 사용 금지.
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