Sample Purification

다음과 같은 가장 일반적인 정제 기법 중 일부는 다운스트림 분석을 위한 시료 전처리를 위해 실험실에서 사용됩니다.

투석

투석은 시료에서 염분이나 다른 저분자량 분자를 제거하기 위해 사용되는 정제 기법입니다. 시료의 완충액 조성 교환에도 사용됩니다. 투석은 많은 양의 완충액이 필요한 수동적 기법입니다.

완충액 교환 및 탈염

탕염은 시료에서 염류 및 다른 저분자량 오염물을 제거하는 단순한 방법입니다. 또한 다른 크로마토그래피 단계 전후에 완충액 교환 및 시약의 신속한 제거로 반응을 종료하도록 사용됩니다.

분획 침전

소량의 시료에서 전체 불순물을 제거하기 위해 분획 침전이 사용됩니다. 침전 기법은 용해도 원리 차이를 이용해 분획을 분리합니다. 단백질은 소수성 정도가 다르기 때문에, 염 농도를 증가시키면 해당 단백질 사이의 소수성 상호작용을 강화시킬 수 있고 참전을 유발합니다.

추출

추출에 의한 시료 전처리는 대상 분석물을 복잡한 시료 또는 다량의 시료에서 분리합니다. 해당 절차는 HPLC와 GC 컬럼을 막을 수 있는 간섭하는 시료 성분을 제거합니다. 이는 또한 분석물 농도를 100~5,000배 증가시켜 검출 민감도를 크게 향상시킵니다. 선별적이고 구체적인 시료 전처리의 일환으로 추출법은 보다 신뢰할 수 있는 크로마토그래피 분석을 보장하도록 도움이 됩니다. 추출법의 종류에는 액체-액체 추출법, 고체상 추출법(SPE), 고체상 미세추출법(SPME)이 있습니다.

친화성 크로마토그래피

친화성 크로마토그래피는 단백질과 크로마토그래피 매트릭스에 결합된 특정 리간드 사이의 가역적 상호작용을 통해 단백질을 분리합니다. 해당 기법은 고도로 선택적이고 다량의 단백질을 정제할 수 있습니다. 친화성 크로마토그래피는 대상 단백질에 적합한 리간드가 있으면 언제든지 사용할 수 있습니다.

친화성 크로마토그래피 정제는 포획과 용출 단계로 구성됩니다. 표적 단백질은 포획 단계에서 크로마토그래피 매트릭스에 고정된 보완적 리간드에 가역적으로 결합합니다. 표적 단백질을 분리, 농축, 안정화, 단백질의 효능과 활성을 보존하는 것이 목표입니다. 결합하지 않은 물질을 제거하기 위해 매트릭스를 세척한 후, 결합된 표적 단백질을 선호하는 용출 조건에서 회수합니다. 경쟁 리간드를 사용하여 특이적으로 용출시키거나 pH, 이온 강도 또는 극성을 변경함으로써 비특이적으로 용출시킵니다. 용출을 통해 표적 단백질을 정제되고 농축된 형태로 수집할 수 있습니다.