細胞増殖ELISA、BrdU（比色分析）のプロトコルとトラブルシューティング

製品番号11647229001

プロトコル

異なる波長での測定

停止溶液の付加と370/492 nmでの測定を行わずに、一定時間の発色を測定して、最適な実験条件を簡単に特定することが可能です。

ただし、停止溶液を付加し、450/690nmで測定すると、実験の特定の時点の後の正確な値をより簡単に測定できるようになります。

細胞増殖試薬WST-1と細胞増殖ELISA BrdU（比色分析）の同時使用

Rocheの『Apoptosis, Cytotoxicity and Cell Proliferation Manual』（第4版）の図52aは、細胞生存率と細胞増殖を同時に測定するための比色法である細胞増殖試薬WST-1と細胞増殖ELISA BrdUの併用を示しています。プロトコルは、図の凡例で簡単に説明されています。アッセイを同時に実行する場合は、両方のキットを注文してください。追加情報は、対応する添付文書に記載されています。

刺激指数の計算

刺激指数を計算するには、最初に2点測定／3点測定の平均を計算してから、各サンプルとコントロールのバックグラウンド値（細胞なし）を差し引きます。次に、サンプル（刺激された細胞）の値をネガティブコントロール（未処理のサンプル）で除算します。これにより、相対値（単位なし）が得られ、異なるテスト間で比較できるようになります。有意な刺激の定義に関しては、細胞の種類、刺激、その他の影響要因に大きく依存するため、各実験設定に対する研究者の経験に基づいて決定する必要があります。

トラブルシューティング

リンパ球のシグナル強度が低い

リンパ球の増殖を研究する場合、細胞は、たとえば、成長因子、サイトカイン、マイトジェンなどで刺激されます。細胞数の増加は、リンパ球の細胞クラスター形成につながる可能性があります。同じ前駆細胞からの細胞が培養プレート内で凝集体を形成します。この効果は、ELISAシステムの抗体認識を妨害し、反応を過小評価する可能性があります。シグナルのばらつきを防ぐには、BrdU標識期間の後、培地を除去する前にピペッティングして細胞を慎重に再懸濁します。これにより、各細胞に均等にアクセスできるようになりBrdU標識の抗体認識を行えるようになります。

この問題は、主にリンパ球などの浮遊細胞に影響を及ぼします。付着細胞でこの問題が発生した場合は、標識が完了した後で標識培地を除去し、細胞を慎重にトリプシン処理して単一細胞を生成します。浮遊細胞の添付文書に従って、マイクロプレートを遠心分離し、細胞を乾燥させた後で、標準の手順を実行してください。

細胞培養システムは、細胞数、増殖活性、インキュベーション期間が大きく異なる可能性があり、過剰に高いまたは低い吸光度値を示します。