iScale Oligos™ su misura

• DNA
• Specifiche degli oligo a DNA iScale
• siRNA
• Specifiche degli oligo a siRNA iScale
• Dimostrazione dell’utilizzo in vivo
• Prodotti correlati
• Bibliografia

Gli iScale Oligos sono oligonucleotidi a DNA e siRNA prodotti su misura per soddisfare necessità particolari e sono disponibili in quantitativi nell'ordine dei milligrammi o dei grammi.

DNA

 

 

Gli oligonucleotidi a DNA personalizzati, in confezioni da milligrammi o grammi, sono indicati per progetti di ricerca in vivo o ad alto rendimento e per scopi commerciali (strumenti di ricerca life science e di diagnostica molecolare, sviluppo di test in laboratorio). Per quantitativi iScale di adattatori NGS, rimandiamo ai nostri oligo per sequenziamento Next-Gen.

Vantaggi

• Quantità commisurate alle effettive necessità sperimentali e commerciali
• Consultazione con i nostri esperti per la messa a punto delle specifiche delle applicazioni
• Laboratorio analitico all'avanguardia, a garanzia dell'elevata qualità dei prodotti

Caratteristiche dei prodotti

Per qualsiasi voce contrassegnata come “Chiedere” o per necessità diverse dalle specifiche generali presentate, manda una richiesta a dnaoligos@milliporesigma.com.

Specifiche degli iScale Oligo a DNA

Quantità	10, 25, 50, 100, 250 & 500 mg  1, 2, 5, 10, & 15 g (per quantitativi maggiori, chiedere)
Purificazione	Dissalazione RP-HPLC e trattamenti per l'impiego "in vivo"
Lunghezza delle sequenze	Da 10 a 55 basi (per lunghezze superiori, chiedere)
Modificazioni	6-FAM, biotina, fosfato, modificatori amminici e altre  Acidi nucleici locked disponibili  Per gli acidi nucleici locked e per altre modifiche, chiedere
Controllo della qualità	Spettrometria di massa effettuata sul 100% degli oligo  HPLC disponibile   Certificati d'Analisi disponibili
Formato	Allo stato secco o in soluzione, in provette o in piastre  Possibilità di pool, aliquote e normalizzazione (per la fattibilità, chiedere)
Servizi	Scambio di sale: gli ioni ammonio tossici derivanti dalla sintesi vengono sostituiti da ioni sodio fisiologicamente tollerabili. Previsto per tutti i tipi di purificazione.    Filtrazione: minimizza i livelli di batteri, muffe e altri contaminanti. Compresa tra i trattamenti per l'impiego "in vivo".    Ricerca delle endotossine: assicura che il livello dei lipopolisaccaridi prodotti dai batteri gram negativi sia inferiore a una soglia accettabile, altrimenti l’ospite potrebbe morire per shock tossico innescato da eventi a cascata del sistema immunitario. Compresa tra i trattamenti per l'impiego "in vivo".

Possibili applicazioni

• Antisenso
• Studi di legame
• PCR/qPCR High-throughput
• Sequenziamento di Sanger e NGS (no adattatori)
• Determinazione della struttura tramite cristallografia a raggi X
• Saggi di immunostimolazione
• Produzione di microarray

Assicurazione della qualità

Alla base dei nostri processi produttivi c’è un robusto Sistema di gestione della qualità (QMS) che assicura la conformità alle nostre certificazioni:

• ISO 9001:2015 per la produzione di oligonucleotidi per la ricerca
• ISO 13485:2016 per la produzione di oligonucleotidi per la diagnostica
• ISO 14001:2015 per un’efficace gestione ambientale

Questa cultura della qualità è integrata in ogni aspetto delle nostre attività. Componenti chiave del nostro QMS sono:

• certificati d'analisi
• controllo della documentazione
• notifica delle modifiche
• gestione dei fornitori
• accordi commerciali
• azioni correttive e preventive

Ciascuno di questi elementi contribuisce all'assicurazione della qualità; inoltre, verifichiamo regolarmente il nostro sistema, ospitando audit interni, di certificatori e di clienti.

siRNA

I nostri siRNA MISSION in quantitativi nell'ordine dei milligrammi e dei grammi, di grado "in-vivo" sono eccellenti per ricerche di RNAi negli animali. Produciamo anche altri tipi di RNA, compresi miRNA e RNA a singolo filamento.

Vantaggi

• Adatti per applicazioni in vivo, compresi la validazione del bersaglio e gli studi preclinici
• Disponibili come siRNA MISSION pre-disegnati oppure per sequenze di siRNA su richiesta dei clienti
• Adatti per la somministrazione diretta o come componenti essenziali di una particolare strategia di formulazione

Caratteristiche dei prodotti

Per qualsiasi voce contrassegnata come “Chiedere” o per necessità diverse dalle specifiche generali presentate, manda una richiesta a asirnarequest@milliporesigma.com.

Specifiche degli iScale Oligo a siRNA S

Quantità	• 3, 50 e 100 mg • Per quantità superiori, chiedere
Purificazione	• Dissalazione , RP-HPLC e In Vivo
Tipo di sequenza	• Da 19 a 50mer simplex o duplex
Modificazioni	• Biotina, fosfato, modificatori amminici (C3, C6, C6 dT, C7, C12), 6-FAM™, Cianina 3,   Cianina 5, Cianina 5.5, 2'-OMe e fosforotioato • Acidi nucleici locked disponibili in tutti i paesi ad eccezione degli Stati Uniti • Per acidi nucleici locked e altre modifiche, chiedere
Controllo della Qualità	• Spettrometria di massa effettuata sul 100% degli oligo* • Possibilità di HPLC analitica • Certificato d'analisi disponibile
Formato	• Allo stato secco, in provette o in piastre • Possibilità di pool e aliquote (per la fattibilità, chiedere)
Servizi	• Se gli oligonucleotidi sono destinati all'impiego in vivo, raccomandiamo il grado di purificazione In Vivo e questi servizi:   - Scambio di sale (gli ioni ammonio tossici prodotti durante la sintesi vengono sostituiti da ioni sodio fisiologicamente tollerabili) - Filtrazione (riduce al minimo batteri, muffe e altri contaminanti) - Ricerca delle endotossine (assicura che il livello dei lipopolisaccaridi prodotti dai batteri gram negativi sia inferiore a una soglia accettabile, altrimenti l’ospite potrebbe morire per uno shock tossico innescato da eventi a cascata del sistema immunitario

*A seconda del sito di produzione, per l'analisi dei duplex di siRNA, potrebbe essere utilizzata la PAGE

Dimostrazione dell’utilizzo in vivo

Per la validazione di un nostro siRNA MISSION di grado In vivo abbiamo collaborato con Bioo Scientific (ora PerkinElmer). Per ulteriori informazioni, si rimanda all’articolo in Drug Discovery & Development— 1 agosto 2008.

In questi esperimenti, cellule H1155luc sono state iniettate in topi NOD/SCID. I tumori formatisi sono stati iniettati di siRNA specifico per la luciferasi o di siRNA "non-targeting", entrambi di grado In Vivo, in formulazioni a base di MaxSuppressor™ In Vivo RNA-LANCEr II. Dopo 24 ore, è stata iniettata una soluzione di D-luciferina e gli animali sono stati osservati con lo strumento NightOWL II LB 983 della Berthold Technologies. Gli animali trattati con siRNA specifico per la luciferasi hanno mostrato una riduzione significativa dell’attività della luciferasi stessa, mentre gli animali trattati con siRNA non-targeting sono risultati positivi alla luminescenza (Figura 1). Questi dati dimostrano l’efficacia dei siRNA di grado In Vivo in formulazioni con MaxSuppressor™ In Vivo RNA-LANCEr II quale agente di veicolazione in vivo.

Figura 1. Animale trattato con siRNA specifico per la luciferasi a sinistra; animale trattato con siRNA non-targeting a destra

Dopo 72 ore dall’iniezione, i tumori sono stati asportati e le proteine sono state estratte e quantificate con il metodo di Bradford (normalizzazione). Le concentrazioni di luciferasi sono state misurate mediante ELISA. Il decremento di questa proteina negli animali trattati con siRNA specifici è stato rappresentato graficamente in confronto a un animale trattato con RNAi non-targeting. L’attività della luciferasi nei tumori è dimezzata (Figura 2).

Figura 2. Ogni replica è un topo differente

Per maggiori informazioni, consulta il nostro Servizio Tecnico aoligotechserv@emdgroup.com.

MISSION è un marchio di Merck KGaA, Darmstadt, Germania e/o di sue consociate. Licenza del marchio.

Bibliografia

1. Stany MP, Vathipadiekal V, Ozbun L, Stone RL, Mok SC, Xue H, Kagami T, Wang Y, McAlpine JN, Bowtell D, et al. Identification of Novel Therapeutic Targets in Microdissected Clear Cell Ovarian Cancers. PLoS ONE. 6(7):e21121. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0021121

2. Beghin A, Belin S, Hage-Sleiman R, Brunet Manquat S, Goddard S, Tabone E, Jordheim LP, Treilleux I, Poupon M, Diaz J, et al. Correction: ADP Ribosylation Factor Like 2 (Arl2) Regulates Breast Tumor Aggressivity in Immunodeficient Mice. PLoS ONE. 4(11): https://doi.org/10.1371/annotation/b0d43779-c9aa-44fe-a46d-71d7d2bc4a6a

3. Ramachandran V, Arumugam T, Langley R, Hwang RF, Vivas-Mejia P, Sood AK, Lopez-Berestein G, Logsdon CD. The ADMR Receptor Mediates the Effects of Adrenomedullin on Pancreatic Cancer Cells and on Cells of the Tumor Microenvironment. PLoS ONE. 4(10):e7502. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0007502

4. Brahmamdam P, Watanabe E, Unsinger J, Chang KC, Schierding W, Hoekzema AS, Zhou TT, McDonough JS, Holemon H, Heidel JD, et al. 2009. TARGETED DELIVERY OF siRNA TO CELL DEATH PROTEINS IN SEPSIS. 32(2):131-139. https://doi.org/10.1097/shk.0b013e318194bcee

5. Fitamant J, Guenebeaud C, Coissieux M, Guix C, Treilleux I, Scoazec J, Bachelot T, Bernet A, Mehlen P. 2008. Netrin-1 expression confers a selective advantage for tumor cell survival in metastatic breast cancer. Proceedings of the National Academy of Sciences. 105(12):4850-4855. https://doi.org/10.1073/pnas.0709810105

6. Watabe M, Aoyama K, Nakaki T. 2008. A Dominant Role of GTRAP3-18 in Neuronal Glutathione Synthesis. Journal of Neuroscience. 28(38):9404-9413. https://doi.org/10.1523/jneurosci.3351-08.2008