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Kit Transcriptor One-Step RT-PCR

sufficient for 50 reactions, sufficient for 150 reactions, suitable for RT-qPCR, suitable for RT-PCR, hotstart

• NACRES: NA.55
• UNSPSC Code: 41106313

Proprietà

• usage: sufficient for 150 reactions, sufficient for 50 reactions
• feature: hotstart
• manufacturer/tradename: Roche
• packaging: pkg of 150 reactions (04655885001), pkg of 50 reactions (04655877001)
• technique(s): RT-PCR: suitable, RT-qPCR: suitable
• input: purified RNA
• detection method: probe-based

Descrizione

General description

La RT-PCR a fase unica è una tecnica molto sensibile per determinare la presenza o l′assenza di stampi di RNA, o per quantificare i livelli di espressione attraverso l′analisi qualitativa, semi-quantitativa o quantitativa dei livelli di trascrizione dell′RNA (per es. per la quantificazione del livello del virus). Questo metodo RT-PCR facilita anche l′amplificazione di messaggi rari per la clonazione. Il formato a fase unica è comodo, mostra una ridotta variabilità da una reazione all′altra e previene la contaminazione riducendo al minimo le fasi con manipolazione.
Il kit Transcriptor One-Step RT-PCR offre i benefici eccezionali della trascrittasi inversa Transcriptor, insieme ai vantaggi di una RT-PCR a fase unica con avviamento a caldo.

Per la RT-PCR a fase unica con avviamento a caldo, utilizzando la miscela enzimatica di trascrittasi inversa Transcriptor, l′inibitore della Rnasi Protector e il sistema Expand, con un innovativo tampone per avviamento a caldo (brevetti in corso di registrazione).

The Kit Transcriptor One-Step RT-PCR fornisce tutti i componenti necessari per la RT-PCR a fase unica (fatta eccezione per primer e stampo) in un comodo formato. La confezione da 50 reazioni include anche 10 reazioni di controllo (RNA di controllo e miscela di primer di controllo).
La miscela di enzimi per RT-PCR del kit contiene quattro differenti enzimi:′ La trascrittasi inversa Transcriptor garantisce una trascrizione inversa sensibile e solida a resa elevata; l′inibitore dell′RNasi Protector, totalmente attivo a temperature elevate, fornisce la massima protezione dello stampo durante la trascrizione inversa; il sistema Expand, una miscela di Taq DNA polimerasi e polimerasi correttiva, riduce al minimo la possibilità di mutazioni, offrendo resa elevata e fedeltà della PCR.
Il tampone di reazione per RT-PCR ottimizzato include dNTP di alta qualità e fornisce le prestazioni globalmente migliorate di un sistema con avviamento a caldo. Il componente esclusivo del tampone per avviamento a caldo′ lega e sequestra i primer a temperature inferiori per impedire che i primer si leghino a siti non specifici. Un altro componente lega il magnesio, in modalità dipendente dalla temperatura, per evitare la sintesi non controllata del DNA. Questa nuova formulazione del tampone è efficace durante la trascrizione inversa come nella PCR, aumentando la sensibilità e la specificità.
La combinazione di tampone di reazione ottimizzato e miscela di enzimi assicura l′efficienza della trascrizione di stampi difficili con struttura secondaria e contenuto in GC elevati senza aumentare la temperatura di reazione.

Application

Il kit Transcriptor One-Step RT-PCR è stato progettato per l′analisi dell′RNA (RNA totale, mRNA, RNA trascritto in vitro o RNA virale) con RT-PCR endpoint rapida, sensibile e specifica utilizzando primer gene-specifici.
Grazie a un innovativo tampone di reazione, il kit unisce una trascrittasi inversa sensibile, ad alto rendimento con il miglioramento delle prestazioni di un sistema con avviamento a caldo per un′amplificazione a elevata fedeltà e alto rendimento di una serie di stampi, incluso l′RNA con un alto contenuto di GC.
Il kit offre un metodo RT-PCR comodo, molto sensibile, a fase unica per generare trascritti fino a 6,5 kb per applicazioni quali:

• Analisi qualitativa, semi-quantitativa o quantitativa dei livelli di trascrizione dell′RNA
• Determinazione della presenza o dell′assenza di stampi di RNA
• Quantificazione dell′espressione genica attraverso l′analisi dell′RNA (per es. per la quantificazione del livello del virus)
• Clonazione di RNA fino a 6,5 kb

Il formato a fase unica è comodo, riduce la variabilità da una reazione all′altra e previene la contaminazione riducendo al minimo le fasi con manipolazione.

Il kit Transcriptor One-Step RT-PCR è stato usato nell′amplificazione:

• di frammenti del virus dell′epatite C (HCV)
• della regione CH3 della catena pesante e della regione polyA della catena leggera[1]
• del virus della leucemia murina (MLV)

Features and Benefits

• Sensibilità e resa elevate in un′ampia gamma di amplificazioni:

Rilevazione anche di 1 solo fg di RNA totale.

• Specificità elevata e riduzione di primer-dimeri

Prestazioni eccellenti con il tampone proprietario per avviamento a caldo del kit (brevetti in corso di registrazione).

• Produce frammenti lunghi:

Genera trascritti fino a 6,5 kb.

• Trascrive una serie di stampi, anche i più difficili (per es. RNA con alto contenuto di GC):

Risolve la struttura secondaria elevata grazie alla trascrittasi inversa termostabile Transcriptor associata a un tampone ottimizzato.

• Risultati migliori in minor tempo con un comodo kit:

Ridurre al minimo le fasi di pipettaggio e impedire la contaminazione usando una miscela enzimatica premiscelata e un tampone ottimizzato che include dNTP per PCR e componenti per l′avviamento a caldo.

• Proteggere il campione di RNA:

Protegge l′RNA dalla degradazione da parte delle RNasi con l′inibitore delle RNasi termostabile Protector che viene fornito e che agisce durante la RT-PCR a fase unica quando gli altri inibitori delle RNasi falliscono.

• Più fiducia nei propri risultati:

Monitoraggio delle prestazioni con le reazioni di controllo fornite.

Analysis Note

La funzione di ogni lotto di kit Transcriptor One-Step RT-PCR è analizzata in RT-PCR. La RT-PCR si esegue con 1.000 copie di HAV RNA, trascritto in vitro (fornito con n. cat. 04 655 877 001). L′impostazione della reazione di controllo e la successiva RT-PCR con primer per un frammento di HAV RNA da 246 bp si eseguono con il protocollo RT-PCR standard (trascrizione inversa a +50 °C per 30 minuti) fornito nel foglietto illustrativo. Con 1.000 copie del target, dopo elettroforesi su gel di agarosio e colorazione con bromuro di etidio si ottiene una banda ben visibile.
Inoltre, si esegue la RT-PCR su una serie di diluizioni di RNA totale di fegato umano (10 ng, 1 ng e 0,1 ng). La RT-PCR con primer specifici per un frammento di ApoB da 2,5 kb si esegue con il protocollo RT-PCR standard (trascrizione inversa a +50 °C per 30 minuti) fornito nel foglietto illustrativo. Con 1 ng di RNA, dopo elettroforesi su gel di agarosio e colorazione con bromuro di etidio si ottiene una banda ben visibile.

Other Notes

Descrizione generale delle trascrittasi inverse

• Miscela di enzimi per RT-PCR che contiene la trascrittasi inversa Transcriptor, l′inibitore della RNasi Protector e il sistema Expand
• Il tampone di reazione per RT-PCR che contiene componenti che mediano l′avviamento a caldo e dNTP a una concentrazione 5x
• Acqua (grado PCR)
• RNA di controllo: HAV RNA, trascritto in vitro *
• Miscela di primer di controllo HAV RNA (primer diretto e inverso) *

* Inclusi solo nella confezione da 50 reazioni.

Da utilizzare solo per ricerca nelle scienze naturali. Non usare in procedure diagnostiche.

Informazioni sulla sicurezza

• hcodes: H412
• pcodes: P273 - P501
• Hazard Classifications: Aquatic Chronic 3
• Classe di stoccaggio: 12 - Non Combustible Liquids
• wgk: WGK 2
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