MAB5266
Anti-Neurofilament H (200 kDa) Antibody
CHEMICON®, mouse monoclonal, N52
Sinónimos:
Anti-CMT2CC, Anti-NFH
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About This Item
UNSPSC Code:
12352203
eCl@ss:
32160702
NACRES:
NA.41
product name
Anticuerpo anti-neurofilamento de 200 kDa, clon N52, clone N52, Chemicon®, from mouse
biological source
mouse
Quality Level
100
300
antibody form
purified immunoglobulin
antibody product type
primary antibodies
clone
N52, monoclonal
species reactivity
human, mouse, monkey, rat, pig
manufacturer/tradename
Chemicon®
technique(s)
immunohistochemistry: suitable
western blot: suitable
isotype
IgG1
NCBI accession no.
UniProt accession no.
shipped in
wet ice
target post-translational modification
unmodified
Gene Information
human ... NEFH(4744)
mouse ... Nefh(380684)
pig ... Nefh(100156492)
rat ... Nefh(24587)
rhesus monkey ... Nefh(717705)
General description
Los neurofilamentos son un tipo de filamento intermedio que sirven como elementos principales del citoesqueleto, que sostiene el axoplasma. Son los componentes fibrilares más abundantes del axón, siendo en promedio 3-10 veces más frecuentes que los microtúbulos axonales. Los neurofilamentos (10 nm de diám.) están constituidos por tres protofibrillas entrelazadas que se componen a su vez de dos tetrámeros de proteínas monómeras, los protofilamentos. Las proteínas triplete del neurofilamento (68/70, 160 y 200 kDa) se encuentran tanto en el sistema nervioso central como en el periférico y suelen ser específicas de las neuronas. La proteína NF-L de 68/70 kDa puede autoensamblarse en una estructura filamentosa; sin embargo, las proteínas NF-M de 160 kDa y NF-H de 200 kDa requieren la presencia de la proteína NF-L de 68/70 kDa para co-ensamblarse. Los Neuromas, los ganglioneuromas, los gangliogliomas, los ganglioneuroblastomas y los neuroblastomas se tiñen positivamente para los neurofilamentos. Aunque típicamente restringidos a las neuronas, los neurofilamentos se han detectado en paragangliomas y feocromocitomas suprarrenales y extrarrenales. Los carcinoides, los carcinomas neuroendocrinos de la piel y los carcinomas de células en avena del pulmón también expresan neurofilamentos. Para obtener más información sobre los neurofilamentos, consulte la tabla de marcadores específicos de tipo de célula del sistema nervioso en línea en la sección de asistencia técnica de CHEMICON.
Specificity
MAB5266 reacciona con la cadena H fosforilada y desfosforilada del neurofilamento de 200kDa (NF-H) en tejidos/extractos normales (Shaw, 1986). MAB5266 se puede utilizar para detectar células de origen neuronal por inmunohistoquímica e inmunotransferencia western. Se ha informado que la reactividad de MAB5266 con NF-H está bloqueada en las células que sobreexpresan cdk-5 (Guidato, 1996).
Immunogen
Segmento de cola carboxi terminal de cadena H porcina enzimáticamente desfosforilada.
Application
Categoría de investigación
Neurociencia
Neurociencia
Este anticuerpo anti-neurofilamento de 200 kDa, clon N52, está validado para utilizar en WB e IH para la detección del neurofilamento de 200 kDa.
Inmunotransferencia Western: 5- 10 μg/ml
Inmunohistoquímica: 5-10 μg/ml
El usuario final debe determinar las diluciones de trabajo óptimas.
Inmunohistoquímica: El anticuerpo N52 reacciona con un fragmento del brazo lateral NF-200 que se encuentra en el extremo del dominio MPR KSP y que contiene el sitio de fosforilación de consenso cdk-5, sin embargo, esta reactividad se elimina si el fragmento NF-200 es fosforilado por cdk-5 {Guidato et al, 1996}. Por lo tanto, para una tinción y reactividad más completas, incluidas las transferencias werstern, se sugiere que las muestras se traten con fosfatasa alcalina antes de la tinción de anticuerpos. Se sugiere el siguiente protocolo de tratamiento:
Protocolo Preparación de las disoluciones:
I. TBS: Tris-HCl, 0,1 mol/l; NaCl, 0,1 mol/l′ pH 8,0.
II. Mezcle la fosfatasa alcalina, 1 mg/ml con 1 mol/l de ZnSO4, 1mol/l MgCl2 y 1mmol/l PMSF; y disuelva en TBS.
NOTA: Es necesario dializar la fosfatasa alcalina contra la disolución I antes de su uso.
Procedimiento:
Los cortes congelados de las muestras de tejido congeladas por choque se secan al aire y luego se fijan con acetona durante 10 minutos a -20°C. Se deja evaporar el exceso de acetona a temperatura ambiente. Incube los cortes en las disoluciones II durante 4 horas a +30 °C y lávelos en TBS 3 veces durante 5 minutos cada una. Los cortes de control negativo se incuban en la disolución II sin fosfatasa alcalina. Tratamiento adicional como siguiente:
- Cubra la preparación con 10-20 μl de disolución de anticuerpos e incube durante 1 hora en una cámara húmeda.
- Sumerja el portaobjetos en TBS y lávelo en TBS 3 veces durante 5 minutos cada una.
- Cubra la preparación con 10-20 μl de una disolución de anticuerpo Ig anti-ratón, marcado con isotiocianato de fluorosceína, e incube en una cámara húmeda a 37°C durante 1 hora.
- Lave el portaobjetos en TBS 3 veces durante 5 minutos cada una.
Inmunohistoquímica: 5-10 μg/ml
El usuario final debe determinar las diluciones de trabajo óptimas.
Inmunohistoquímica: El anticuerpo N52 reacciona con un fragmento del brazo lateral NF-200 que se encuentra en el extremo del dominio MPR KSP y que contiene el sitio de fosforilación de consenso cdk-5, sin embargo, esta reactividad se elimina si el fragmento NF-200 es fosforilado por cdk-5 {Guidato et al, 1996}. Por lo tanto, para una tinción y reactividad más completas, incluidas las transferencias werstern, se sugiere que las muestras se traten con fosfatasa alcalina antes de la tinción de anticuerpos. Se sugiere el siguiente protocolo de tratamiento:
Protocolo Preparación de las disoluciones:
I. TBS: Tris-HCl, 0,1 mol/l; NaCl, 0,1 mol/l′ pH 8,0.
II. Mezcle la fosfatasa alcalina, 1 mg/ml con 1 mol/l de ZnSO4, 1mol/l MgCl2 y 1mmol/l PMSF; y disuelva en TBS.
NOTA: Es necesario dializar la fosfatasa alcalina contra la disolución I antes de su uso.
Procedimiento:
Los cortes congelados de las muestras de tejido congeladas por choque se secan al aire y luego se fijan con acetona durante 10 minutos a -20°C. Se deja evaporar el exceso de acetona a temperatura ambiente. Incube los cortes en las disoluciones II durante 4 horas a +30 °C y lávelos en TBS 3 veces durante 5 minutos cada una. Los cortes de control negativo se incuban en la disolución II sin fosfatasa alcalina. Tratamiento adicional como siguiente:
- Cubra la preparación con 10-20 μl de disolución de anticuerpos e incube durante 1 hora en una cámara húmeda.
- Sumerja el portaobjetos en TBS y lávelo en TBS 3 veces durante 5 minutos cada una.
- Cubra la preparación con 10-20 μl de una disolución de anticuerpo Ig anti-ratón, marcado con isotiocianato de fluorosceína, e incube en una cámara húmeda a 37°C durante 1 hora.
- Lave el portaobjetos en TBS 3 veces durante 5 minutos cada una.
Subcategoría de investigación
Neurofilamentos y metabolismo neuronal
Marcadores neuronales y gliales
Neurofilamentos y metabolismo neuronal
Marcadores neuronales y gliales
Physical form
Inmunoglobulina purificada (cromatografía de intercambio iónico). Líquido en tampón de fosfato 0,02 M, NaCl 0.25M con azida sódica al 0,1 %, pH 7,6
Presentación: Purificada
Storage and Stability
Conservar a 2-8°C en alícuotas no diluidas durante un máximo de 6 meses. Evite ciclos repetidos de congelación y descongelación.
Other Notes
Concentración: Para conocer la concentración específica del lote, consulte el certificado de análisis.
Legal Information
CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
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Optional
Referencia del producto
Descripción
Precios
Storage Class
10 - Combustible liquids
wgk_germany
WGK 2
flash_point_f
Not applicable
flash_point_c
Not applicable
Certificados de análisis (COA)
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