AB16901

Anticuerpo anti-proteína fluorescente verde

Chemicon^®, from chicken

• Sinónimos: GFP, eGFP
• UNSPSC Code: 12352203
• eCl@ss: 32160702
• NACRES: NA.41

Propiedades

• biological source: chicken
• Quality Level: 100
• antibody form: purified immunoglobulin
• antibody product type: primary antibodies
• clone: polyclonal
• species reactivity: vertebrates
• manufacturer/tradename: Chemicon^®
• technique(s): immunocytochemistry: suitable; immunoprecipitation (IP): suitable; western blot: suitable
• UniProt accession no.: P42212
• shipped in: wet ice
• target post-translational modification: unmodified

Descripción

General description

La proteína verde fluorescente (GFP) de la medusa Aequorea victoria se utiliza como indicador fluorescente para supervisar la expresión génica en una variedad de sistemas celulares, incluidos organismos vivos y tejidos fijados. A diferencia de otros reporteros bioluminiscentes, la GFP emite fluorescencia en ausencia de sustratos, cofactores u otras proteínas intrínsecas o extrínsecas. La GFP purificada es un monómero de 27 kDa compuesto por 238 aminoácidos y emite luz verde (emisión máxima a 509 nm) cuando es excitada con luz azul o UV.

Specificity

El AB16901se produce contra la GFP nativa muy purificada de Aequorea victoria. Es reactivo con GFP de fuentes nativas y recombinantes.

Immunogen

Una proteína fluorescente verde recombinante (GFP) que contiene una etiqueta 6-his se purificó mucho mediante cromatografía de afinidad en columna de níquel seguida de cromatografía en una columna de filtración de gel P-100. El producto resultante estaba presente solo como un singl

Application

Categoría de investigación
Etiquetas de epítopo y uso general

Este anticuerpo anti-proteína fluorescente verde está validado para utilizar en IC, IP, WB para la detección de la proteína fluorescente verde.

Inmunotransferencia: AB16901 detecta una banda del peso molecular apropiado (30 kDa) en lisados de E.coli que expresan la GFP pero no en E.coli que no la expresa o en lisados preparados de E.coli que contienen el plásmido que expresa la GFP, pero no inducido, detecta la GFP en lisados de COS o neuronas primarias o fibroblastos transfectados con plásmidos que dirigen la expresión de GFP o una proteína de fusión tau-GFP. No se detectó señal alguna cuando se fraccionaron 50μg de proteína de lisado cerebral de rata (control negativo) en SDS-PAGE. Los valores fueron de 10-20 000 cuando se detectaron con un anticuerpo secundario anti-pollo conjugado con peroxidasa de rábano picante mediante ECL o mediante un análisis colorimétrico utilizando DAB.

Inmunocitoquímica: La GFP puede detectarse en células transfectadas con un plásmido que dirige la expresión de la GFP o de una proteína GFP-fusión. Las células que no expresan GFP no exhiben tinción detectable. La unión de AB se determinó utilizando anticuerpos secundarios anti-pollo conjugados con HRP y se visualizó mediante DAB. Los Ac anti-GFP se utilizaron a una dilución 1-2.500-5.000 veces. Las células se fijaron utilizando formaldehído al 4 % en PBS (pH 7,4). Para inmunocitoquímica, los cultivos se fijaron en formaldehído al 4 % en PBS pH 7,4, durante 20 minutos a temperatura ambiente. Las células se permeabilizaron con Triton X-100 al 0,2 % y suero al 2  % (correspondiente al animal en el que se indujo el anticuerpo secundario) en PBS durante 20 minutos a temperatura ambiente. A continuación, los cultivos celulares se incubaron con antisueros primarios en PBS que contenía suero al 2 % (como se mencionó anteriormente), a 4°C, durante la noche. La unión de los anticuerpos se detecta utilizando un sistema de detección de avidina/biotina/peroxidasa. Los cultivos se lavaron cuatro veces (10 minutos cada una) entre las etapas, y el producto de la reacción se desarrolló con una disolución de diaminobencidina al 0,05 % / peróxido de hidrógeno al 0,02 % en hielo durante 8-10 minutos. AB16901 se ha utilizado para detectar GFP en neuronas primarias y fibroblastos de pez cebra.

Inmunoprecipitación: 5μg de anticuerpo por no más de 500μl de lisado celular. Es importante utilizar un anticuerpo secundario de conejo anti-pollo para la captura o microesferas anti-pollo, ya que la IgG de pollo no reacciona con la proteína A ni la proteína G.

El usuario final debe determinar las diluciones de trabajo óptimas.

Subcategoría de investigación
Etiquetas de epítopo

Target description

El peso molecular: de la GFP es de 27 kDa. Depende del peso molecular de la proteína de fusión que se esté detectando.

Physical form

Inmunoglobulina de pollo purificada en TBS, a pH 7,5 con acida sódica al 0,02 %.

Precipitación con sulfato de amonio

Presentación: Purificada

Storage and Stability

La disolución de anticuerpos sin diluir es estable durante aproximadamente 6 meses conservada entre 2 y 8°C.

Durante el transporte, pequeños volúmenes de producto quedarán ocasionalmente atrapados en el precinto del vial del producto. Para productos con volúmenes de 200μl o inferiores, recomendamos golpear suavemente el vial sobre una superficie dura o centrifugar brevemente el vial en una centrífuga de sobremesa para desalojar cualquier líquido de la tapa del recipiente.

Analysis Note

Control
Proteína de fusión GFP expresada en células

Other Notes

Concentración: Para conocer la concentración específica del lote, consulte el certificado de análisis.

Legal Information

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Disclaimer

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Información de seguridad

• Storage Class: 12 - Non Combustible Liquids
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