Épigénétique

Modification des histones

La chromatine est un complexe constitué d'ADN génomique et de protéines associées dans le noyau. Les modifications de la structure de la chromatine et les interactions entre les protéines de la chromatine jouent un rôle direct dans la régulation épigénétique. La structure de la chromatine est maintenue par les histones, classe majeure de protéines de la chromatine. Les histones forment le nucléosome, complexe contenant 2 sous-unités de chacune des histones H2A, H2B, H3 et H4. En dehors du complexe central, l'histone de liaison H1 occupe l'ADN internucléosomique. Ce complexe nucléosomique maintient la structure compacte de la chromatine. Des modifications des histones spécifiques de certains sites (méthylation, acétylation, phosphorylation, ubiquitinylation, citrullination…) peuvent altérer la structure locale de la chromatine et réguler la transcription, la réparation, la recombinaison et la réplication de l'ADN. Les protéines associées à la chromatine autres que les histones constituent un groupe divers constitué de milliers de types de protéines différents, dont les facteurs de transcription, les polymérases, les récepteurs hormonaux et d'autres enzymes nucléaires.

Méthylation de l'ADN

La méthylation de l'ADN est un mécanisme épigénétique important qui régule l'extinction génique, l'empreinte génomique, le développement embryonnaire et la stabilité des chromosomes. La méthylation de l'ADN se produit sur le 5e atome de carbone des résidus cytosine, principalement dans les dinucléotides CpG, pour former des 5-méthylcytosines (5-mC). Cette réaction est catalysée par des ADN méthyltransférases (DNMT pour "DNA methyltransferase"). Les résidus 5-méthylcytosine peuvent également être hydroxylés par des enzymes TET ("Ten-Eleven Translocation") pour former des résidus 5-hydroxyméthylcytosine (5-hmC) dont le rôle est différent de celui des 5-mC. Nous vous proposons des outils robustes qui vous permettent non seulement de détecter et de quantifier la 5-mC et la 5-hmC, mais également de faire la distinction précise entre ces modifications.

Kits d'immunoprécipitation de chromatine (technique ChIP)

La détection quantitative des modifications des histones est importante pour mieux comprendre la régulation épigénétique des processus cellulaires dans les tissus normaux et cancéreux. La technique la plus utilisée pour étudier l'influence des modifications des histones et d'autres protéines de liaison à l'ADN (comme les facteurs de transcription) sur l'expression génique est l'immunoprécipitation de la chromatine (technique ChIP pour "Chromatin Immunoprecipitation") couplée à une PCR qualitative (qPCR). La technique ChIP consiste à créer des liaisons chimiques entre des protéines et des séquences d'ADN, puis à immunoprécipiter les complexes formés à l'aide d'anticorps et de billes pour récupérer les histones modifiées ou d'autres protéines d'intérêt. Les modifications des histones les plus étudiées (et les mieux connues) sont l'acétylation, la phosphorylation, la méthylation et l'ubiquitinylation. Les modifications des histones régulent la transcription, la réparation, la recombinaison et la réplication de l'ADN et peuvent modifier l'architecture locale de la chromatine. Découvrez notre large gamme de kits pour l'analyse de schémas complexes de modifications des histones.

Régulation transcriptionnelle et post-transcriptionnelle : régulation de l'ARN

Les recherches sur l'expression génique se sont traditionnellement concentrées sur la régulation de la transcription par les interactions entre les facteurs de transcription et des sites de liaison spécifique, les modifications des histones au sein de la chromatine et la coordination de la dynamique de la chromatine associée aux modifications de la transcription génique. Aujourd'hui, la recherche sur l'expression génique tente d'élucider la dynamique de la régulation de l'ARN, dans le but ultime de faire le lien entre la régulation de la transcription et l'expression des protéines. Les protéines de liaison à l'ARN (RBP pour "RNA-Binding Protein") jouent un rôle clé dans la régulation post-traductionnelle de l'expression génique.

Régulation de l'ARN : kits d'immunoprécipitation d'ARN (technique RIP)

L'immunoprécipitation de l'ARN (technique RIP pour "RNA Immunoprecipitation") peut être considérée comme le pendant de la technique ChiP (technique plus connue d'immunoprécipitation de l'ADN), pour l'ARN. Elle permet d'identifier des molécules d'ARN spécifiques associées à certaines protéines de liaison dans le noyau ou le cytoplasme. La technique RIP commence par l'immunoprécipitation de complexes endogènes de protéines de liaison à l'ARN, suivie du co-isolement des espèces d'ARN associées aux complexes immunoprécipités. Une fois ces espèces d'ARN purifiées, elles peuvent être étudiées et identifiées (ARNm ou ARN non codants) au moyen de diverses applications, dont la RT-PCR quantitative, l'analyse par puces à ADN (RIP-ChIP) et le séquençage à haut débit (RIP-Seq).