T9935

Trypsine from bovine pancreas

essentially salt-free, lyophilized powder, ≥9,000 BAEE units/mg protein, BioReagent, suitable for cell culture

• Synonyme(s) : Serine Protease 1
• Numéro CAS: 9002-07-7
• Numéro de classification (Commission des enzymes): 3.4.21.4 (BRENDA, IUBMB)
• Numéro CE : 232-650-8
• Numéro MDL: MFCD00082094
• Code UNSPSC : 12352204
• Nomenclature NACRES : NA.54

Propriétés

• Gamme de produits: BioReagent
• Niveau de qualité: 200
• Forme: essentially salt-free, lyophilized powder
• Activité spécifique: ≥9,000 BAEE units/mg protein
• Poids mol.: 23.8 kDa
• Composition: protein, ≥80%
• Technique(s): cell culture | mammalian: suitable
• Solubilité: hydrochloric acid: soluble 1 mM
• Température de stockage: −20°C

Description

Application

La trypsine de pancréas de bovin a été utilisée dans la digestion enzymatique de cellules de nucleus pulposus (NP) lors de l′isolement de cellules de NP humaines. Elle a également été employée comme réactif d′ « immunopanning » pour la purification de cellules.

Pour la digestion de peptides par la trypsine, utiliser un rapport trypsine/peptide d′environ 1/100 à 1/20. Ce produit est généralement utilisé pour détacher les cellules adhérentes d′une surface de culture. La concentration en trypsine nécessaire pour déloger les cellules de leur substrat dépend principalement du type de cellules et de l′ancienneté de la culture. La trypsine a également été utilisée pour remettre en suspension des cellules lors d′une culture cellulaire, en recherche protéomique pour la digestion de protéines et dans diverses digestions en gel. Parmi ses autres applications, on peut citer l′évaluation de la cristallisation par des techniques à base de membrane et la détermination du fait que les vitesses et les rendements de repliement des protéines peuvent être limités par la présence de pièges cinétiques.

Actions biochimiques/physiologiques

La trypsine clive les peptides du côté C-terminal des résidus de lysine et d′arginine. La vitesse d′hydrolyse de cette réaction diminue si l′un ou l′autre côté du site de clivage comporte un résidu acide, et l′hydrolyse est interrompue si un résidu de proline se trouve du côté carboxyle du site de clivage. L′activité trypsine est optimale à pH 7-9. La trypsine peut également cliver les liaisons ester et amide des dérivés synthétiques des acides aminés. De l′EDTA est ajouté aux solutions de trypsine pour servir d′agent chélateur, afin de neutraliser les ions calcium et magnésium qui dissimulent les liaisons peptidiques sur lesquelles la trypsine agit. L′élimination de ces ions augmente l′activité enzymatique.

Les inhibiteurs de protéase à sérine, notamment le DFP, la TLCK, l′APMSF, l′AEBSEF et l′aprotinine, inhibent la trypsine.

Composants

La trypsine se compose d′un polypeptide à chaîne unique de 223 résidus acides aminés, produit par l′élimination de l′hexapeptide N-terminal présent sur le trypsinogène qui est clivé au niveau de la liaison peptidique Lys-Ile. La séquence d′acides aminés est réticulée par 6 ponts disulfure. Il s′agit de la forme native de la trypsine, la bêta-trypsine. La bêta-trypsine peut être autolysée, avec un clivage au niveau du résidu Lys-Ser, pour produire de l′alpha-trypsine. La trypsine fait partie de la famille des protéases à sérine.

Attention

Les solutions dans du HCl 1 mM sont stables 1 an en aliquotes stockées à -20 °C. La présence de Ca²⁺ réduit également l′autolyse de la trypsine par elle-même et maintient sa stabilité en solution. La trypsine retient également la majeure partie de son activité dans l′urée 2,0 M, la guanidine HCl 2,0 M ou le SDS à 0,1 % (p/v).

Définition de l'unité

Une unité de BAEE produit une A₂₅₃ de 0,001 par minute à pH 7,6 et à 25 °C lorsque le BAEE est utilisé comme substrat.

Notes préparatoires

Ce produit est issu de pancréas provenant de Nouvelle-Zélande. Il est soluble dans du HCl 1 mM à 1 mg/ml.
Pour les applications impliquant de l′EDTA, il est recommandé de solubiliser la trypsine avec une solution saline tamponnée dépourvue d′ions Ca²⁺ ou Mg²⁺.

Informations sur la sécurité

• Pictogrammes: GHS08,GHS07
• Mention d'avertissement: Danger
• Mentions de danger: H315,H319,H334,H335
• Conseils de prudence: P261 - P264 - P271 - P280 - P302 + P352 - P305 + P351 + P338
• Classification des risques: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
• Organes cibles: Respiratory system
• Code de la classe de stockage: 11 - Combustible Solids
• Classe de danger pour l'eau (WGK): WGK 1
• Équipement de protection individuelle: dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves