ECM205
Kit de criblage MEC Millicoat®, avec ECM101-ECM105 (1 de chaque)
Millicoat®, pkg of 96-well plate(s) (for fibronectin, vitronectin, laminin, collagen I & collagen IV)
Synonyme(s) :
Formerly under the CytoMatrix brand name.
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About This Item
Code UNSPSC :
12352202
eCl@ss :
32161000
Nomenclature NACRES :
NA.77
Produits recommandés
Espèces réactives
human
Niveau de qualité
Fabricant/nom de marque
Chemicon®
Millicoat®
Conditionnement
pkg of 96-well plate(s) (for fibronectin, vitronectin, laminin, collagen I & collagen IV)
Technique(s)
activity assay: suitable
cell based assay: suitable
Entrée
sample type neural stem cell(s)
sample type: human embryonic stem cell(s)
sample type: mouse embryonic stem cell(s)
sample type epithelial cells
sample type hematopoietic stem cell(s)
sample type pancreatic stem cell(s)
sample type induced pluripotent stem cell(s)
sample type mesenchymal stem cell(s)
Méthode de détection
colorimetric
Conditions d'expédition
wet ice
Description générale
L'adhérence cellulaire joue un rôle majeur dans la communication et la régulation cellulaires, et est fondamentale pour le développement et le maintien des tissus. Les scientifiques étudient en permanence l'adhérence et la migration de nombreux types de cellules différents sur diverses protéines composant la matrice extracellulaire (MEC). Les barrettes pour l'étude de l'adhérence cellulaire Millicoat® se présentent sous la forme de barrettes de 12 x 8 puits détachables en plaques, pour des essais pratiques et flexibles. Les puits des rangées A à G sont enduits d'une protéine de MEC humaine. La rangée H de chaque barrette est enduite de BSA, qui sert de contrôle négatif aux essais. Le kit de criblage Millicoat contient des plaques individuelles à 96 puits pour la fibronectine, la vitronectine, la laminine, le collagène de type I et le collagène de type IV. Les cellules sont ensemencées sur le substrat enduit. Puis les cellules adhérentes sont fixées et marquées. L'adhérence relative est déterminée par lecture de l'absorbance.
Application
Domaine de recherche
Structure cellulaire
Structure cellulaire
Le kit de criblage Millicoat® contient des plaques individuelles à 96 puits pour la fibronectine, la vitronectine, la laminine, le collagène de type I et le collagène de type IV.
PROCÉDURE :
REMARQUE : Les performances de l'essai sont optimales avec les cultures cellulaires n'ayant pas encore atteint la confluence. Pour ce faire, diviser les cellules 1 à 2 jours avant de réaliser l'essai.
1. Réhydrater les barrettes avec 200 ml de PBS par puits pendant au moins 15 minutes à température ambiante. Retirer le PBS des barrettes réhydratées.
2. Préparer une suspension de cellules individuelles, de préférence avec un tampon de dissociation non enzymatique. La densité cellulaire optimale peut être déterminée par titrage des cellules. La plage de départ habituellement utilisée se situe entre 1x10E05 et 1x10E07 cellules/ml.
3. Ajouter à chaque puits 100 ml de la suspension de cellules diluée. Incuber la plaque à 37 °C pendant 1 heure dans un incubateur à CO2. Laver délicatement la plaque à 3 reprises avec du PBS contenant des ions Ca2+/Mg2+ (200 ml/puits).
4. Ajouter à chaque puits 100 ml de cristal violet à 0,2 % dans de l'éthanol à 10 %. Incuber pendant 5 minutes à température ambiante. Retirer le colorant des puits. Laver délicatement la plaque à 3 reprises avec du PBS (300 ml/puits).
5. Ajouter à chaque puits 100 ml de tampon de solubilisation (mélange 50/50 de NaH2PO 0,1 M à pH 4,5 et d'éthanol à 50 %). Laisser les barrettes incuber à température ambiante et les secouer doucement jusqu'à ce que le colorant fixé aux cellules soit complètement solubilisé (cela prend environ 5 minutes).
6. Déterminer l'absorbance à 540-570 nm sur un lecteur de microplaque.
REMARQUE : Les performances de l'essai sont optimales avec les cultures cellulaires n'ayant pas encore atteint la confluence. Pour ce faire, diviser les cellules 1 à 2 jours avant de réaliser l'essai.
1. Réhydrater les barrettes avec 200 ml de PBS par puits pendant au moins 15 minutes à température ambiante. Retirer le PBS des barrettes réhydratées.
2. Préparer une suspension de cellules individuelles, de préférence avec un tampon de dissociation non enzymatique. La densité cellulaire optimale peut être déterminée par titrage des cellules. La plage de départ habituellement utilisée se situe entre 1x10E05 et 1x10E07 cellules/ml.
3. Ajouter à chaque puits 100 ml de la suspension de cellules diluée. Incuber la plaque à 37 °C pendant 1 heure dans un incubateur à CO2. Laver délicatement la plaque à 3 reprises avec du PBS contenant des ions Ca2+/Mg2+ (200 ml/puits).
4. Ajouter à chaque puits 100 ml de cristal violet à 0,2 % dans de l'éthanol à 10 %. Incuber pendant 5 minutes à température ambiante. Retirer le colorant des puits. Laver délicatement la plaque à 3 reprises avec du PBS (300 ml/puits).
5. Ajouter à chaque puits 100 ml de tampon de solubilisation (mélange 50/50 de NaH2PO 0,1 M à pH 4,5 et d'éthanol à 50 %). Laisser les barrettes incuber à température ambiante et les secouer doucement jusqu'à ce que le colorant fixé aux cellules soit complètement solubilisé (cela prend environ 5 minutes).
6. Déterminer l'absorbance à 540-570 nm sur un lecteur de microplaque.
Stockage et stabilité
Peut être conservé entre 2 et 8 °C dans le sachet en aluminium pendant au moins 3 mois. Les barrettes non utilisées peuvent être replacées dans le sachet et stockées. Veiller à ce que le dessiccant reste à l'intérieur du sachet, et que le sachet soit fermé hermétiquement.
Informations légales
CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
MILLICOAT is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
Clause de non-responsabilité
Sauf indication contraire dans notre catalogue ou tout autre document associé au(x) produit(s), nos produits sont uniquement destinés aux activités de recherche et ne sauraient être utilisés à d'autres fins, ce qui inclut, sans toutefois s'y limiter, les utilisations commerciales non autorisées, les utilisations diagnostiques in vitro, les utilisations thérapeutiques ex vivo ou in vivo, ou tout type de consommation ou d'application chez l'homme ou l'animal.
Code de la classe de stockage
11 - Combustible Solids
Certificats d'analyse (COA)
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Protocoles
This page covers the ECM coating protocols developed for four types of ECMs on Millicell®-CM inserts, Collagen Type 1, Fibronectin, Laminin, and Matrigel.
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