CC160-350UG

Substrat de laminine ECMatrix-511 E8

Xeno-free laminin-511 coating for feeder-free pluripotent stem cell cultures, 350 μg (CHO-S derived)

• Synonyme(s) : E8 Laminin, E8 Laminin Substrate, ECMatrix Laminin Substrate
• Code UNSPSC : 12352202
• Nomenclature NACRES : NA.81

Propriétés

• Forme: liquid
• Conditionnement: pkg of 2 x 175 μg
• Technique(s): cell culture | stem cell: suitable
• Température de stockage: 2-8°C

Description

Description générale

"Le substrat ECMatrix permet de mettre en place des procédures de travail plus simples pour le traitement des cellules souches pluripotentes induites (CSPi) humaines. Nous gagnons du temps en n'ayant plus besoin de pré-enduire notre matériel de culture, tout en maintenant des cultures de cellules souches pluripotentes de haute qualité." - Chercheur, groupe Bioprocédés de thérapies cellulaires.

"Les cellules souches embryonnaires (CSE) humaines cultivées sur le substrat ECMatrix présentent une grande viabilité cellulaire et une forte prolifération et ont pu se différencier après plusieurs repiquages. De plus, le substrat nous fait gagner du temps en éliminant le besoin de pré-enduire le matériel de culture." - Scientifique principal, spécialiste des cellules souches, groupe Développement de procédés de médecine régénérative.

Les cellules souches pluripotentes humaines (CSE et CSPi) expriment principalement le type d'intégrine α6β1 et peuvent donc être maintenues de manière stable et cultivées efficacement sans cellules nourricières dans des récipients de culture enduits de sa partenaire de liaison, la laminine-511. Toutefois, la laminine-511 n'est pas adaptée à la production à grande échelle en raison de son poids moléculaire élevé et de sa nature hétérotrimérique. Le groupe du professeur Kiyotoshi Sekiguchi (Matrixome, Inc.) a résolu ce problème en produisant un fragment E8 recombinant de la laminine-511 à grande échelle tout en conservant l'activité de liaison complète à l'intégrine.

Application

Revêtement de laminine-511 exempt de xéno-contaminants pour cultures de cellules souches pluripotentes sans cellules nourricières, 350 µg (dérivé de cellules CHO-S)

Caractéristiques et avantages

Le substrat de laminine ECMatrix-511 E8 peut être utilisé pour la culture de cellules souches pluripotentes dans des conditions exemptes de cellules nourricières avec de nombreux avantages supplémentaires par rapport aux méthodes traditionnelles, notamment :

• Un format sans ingrédients d'origine animale ni xéno-contaminants : uniforme d'un lot à l'autre, sans qu'aucune présélection ne soit nécessaire
• Pas besoin de pré-enduire les plaques : gagnez du temps en ajoutant simplement du milieu lors du repiquage des cellules
• Permet de repiquer des cellules isolées sans utiliser l'inhibiteur de kinase ROCKi : idéal pour l'édition CRISPR ou l'isolement de clones
• Taux d'adhérence et de croissance plus élevés : faites vos expériences plus rapidement
• Facile à manipuler : pas besoin de refroidir les consommables de culture cellulaire

Conditionnement

350 μg (2 × 175 μg)

Composants

2 × 175 μg de substrat de laminine ECMatrix-511 E8 (0,5 mg/ml dans du PBS). Produit exprimé dans des cellules CHO-S.

Qualité

• Pureté (SDS-PAGE) : > 95 %
• Analyse d'endotoxines : = 750 UE/mg
• Analyse des mycoplasmes : négative
• Test de stérilité : négatif
• Test de liaison à l'intégrine (kDa) = 10 nM

Notes préparatoires

En fonction de l'application, les cellules souches pluripotentes peuvent être cultivées selon une méthode avec ou sans pré-enduction.

Méthode sans pré-enduction :
1. Détacher les cellules sous forme de petits amas ou de cellules individuelles en utilisant Accutase.
2. Ajouter le substrat ECMatrix-511 à du milieu frais à une concentration finale de 0,25 µg/cm² (par exemple : pour un puits d'une plaque de 6 puits, ajouter 5 µl de la solution mère à 0,5 mg/ml).
3. Ajouter les cellules au mélange ECMatrix-511/milieu et cultiver les cellules à la densité souhaitée.

Méthode avec pré-enduction :
1. Diluer la solution mère à 0,5 mg/ml avec du PBS stérile jusqu'à obtenir une solution de travail à 2,5 μg/ml.
2. Enduire d'ECMatrix-511 les supports à une concentration de 0,25 μg/cm² (par exemple, pour un puits d'une plaque de 6 puits, ajouter 1 ml de la solution de travail à 2,5 μg/ml).
3. Incuber pendant 1 heure à 37 °C, 3 heures à température ambiante ou toute une nuit à 4 °C.
4. Avant utilisation, retirer de la surface enduite le fluide restant (ne pas rincer).
5. Détacher les cellules sous forme de petits amas en utilisant Accutase.
6. Cultiver les cellules à la densité souhaitée.

Remarque : Ne pas laisser sécher les plaques, centrifuger brièvement tous les liquides dans le tube avant utilisation, et éviter les congélations-décongélations répétées.

Stockage et stabilité

Les substrats de laminine ECMatrix-511 E8 doivent être conservés entre 2 et 8 °C. Éviter les cycles de congélation/décongélation multiples et protéger de la lumière.

Clause de non-responsabilité

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Informations sur la sécurité

• Code de la classe de stockage: 12 - Non Combustible Liquids