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Disoluciones tampón para HPLC

Montón de cristales salinos de tampón

Los tampones son disoluciones de un ácido débil y su base conjugada o de una base débil y su ácido conjugado. En química analítica, los tampones se utilizan normalmente en cromatografía de líquidos de alta resolución de fase inversa (RP-HPLC), cuando la muestra contiene grupos funcionales ácidos o básicos. Los tampones mitigan la influencia de los iones de hidrógeno o hidronio y de hidróxido, reduciendo posteriormente la fluctuación del pH.   

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Disoluciones tampón en la fase móvil

La elección adecuada de la disolución tampón en lo referente a la amortiguación de especies, fuerza iónica y pH, es el paso más crítico en el desarrollo del método RP-HPLC para analitos iónicos. La retención de analitos iónicos en la RP-HPLC se ve afectada fundamentalmente por el pH de la fase móvil. Por lo tanto, el control del pH de la fase móvil en la RP-HPLC es uno de los parámetros más importantes para una separación efectiva del analito.

El intervalo de pH típico para separaciones de fase inversa en columnas de sílice oscila entre 2 y 8. El tampón debe tener un pKa próximo al pH deseado, ya que los tampones controlan el pH mejor en su pKa. Como regla general, la elección de un tampón con un valor de pKa < 2 unidades del pH de fase móvil deseado es lo ideal. Ofrecemos tampones de calidad HPLC para un amplio intervalo de pH que satisfacen todos los requisitos cromatográficos de su laboratorio.

Factores que deben tenerse en cuenta al elegir un tampón para HPLC

Pureza química

La calidad de los aditivos de la fase móvil (disoluciones tampón, sales, ácidos y bases) junto con los disolventes orgánicos utilizados en un experimento HPLC deben adaptarse a la sensibilidad del detector y protocolo de elución. Se recomienda utilizar disolventes y reactivos de gran calidad para conseguir una cromatografía óptima.

Compatibilidad química

La composición de la disolución tampón junto con el pH de la fase móvil deben elegirse de acuerdo con el material de la carcasa de la columna y la naturaleza de la fase estacionaria. Esto evita daños a la columna y al lecho.

Solubilidad del tampón

Lo ideal es que la disolución tampón sea completamente hidrosoluble y que no precipite. La concentración del tampón debe elegirse con cuidado para evitar la precipitación a concentraciones más elevadas, cuando el tampón se mezcla con el disolvente orgánico. Si no se tiene esto en cuenta, puede crear problemas de funcionamiento en las bombas y provocar el bloqueo de la columna de HPLC.

Fuerza del tampón

Un eluyente que muestra una interacción débil con la fase estacionaria sólo es capaz de eluir de la columna analitos débilmente unidos, mientras que una interacción fuerte provoca la elución de moléculas de la muestra fuertemente unidas. La elución o fuerza del disolvente de varios disolventes depende del tipo de fase estacionaria utilizada. Después de la fuerza de elución, la viscosidad y la absorbancia UV de la disolución tampón desempeñan un papel importante en cuanto a su idoneidad de uso en análisis mediante HPLC. 

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