UDGHL-RO

Uracil-ADN glucosilasa, termolábil

recombinant from marine bacterium BMTU 3346

• Sinónimos: PCR, UDG
• Comisión internacional de enzimas: 3.2.2.15 (BRENDA, IUBMB)
• Código UNSPSC: 41106300

Propiedades

• origen biológico: bacterial (marine bacterium BMTU 3346)
• Nivel de calidad: 100
• recombinante: expressed in E. coli
• Formulario: solution
• envase: pkg of 100 U (11775367001); pkg of 500 U (11775375001)
• fabricante / nombre comercial: Roche
• concentración: 1000 U/mL
• técnicas: activity assay: suitable
• color: colorless
• pH óptimo: 8.3-8.9
• solubilidad: water: soluble
• idoneidad: suitable for enzyme test
• aplicaciones: life science and biopharma
• actividad extraña: DNA decontamination:, present ( >= 10 e5 copies ); RNases with MS- II- RNA ≤10 units, none detected; Unspec.nucleases w. lambda-DNA 20 units, none detected; Unspec.nucleases w.M13mp9ss-DNA ≤20 units, none detected; Unspec.nucleases w.pBR 322-DNA ≤20 units, none detected
• temp. de almacenamiento: −20°C

Descripción

Descripción general

La uracil-ADN glucosilasa sensible al calor contiene la enzima de igual nombre encontrada en la bacteria marina BMTU 3346. Como la UNG de E. coli, hidroliza los enlaces uracil-glucosídicos en el ADN monocatenario o bicatenario, cortando el uracilo y creando sitios abásicos sensibles a los álcalis en el ADN. Esos sitios abásicos pueden ser hidrolizados mediante tratamiento con endonucleasas, calor o álcali. Dependiendo de cómo se prepare el ADN, la uracil-ADN glucosilasa puede utilizarse para conseguir una rotura U-ADN general, específica de sitio o específica de cadena. Esta enzima muestra menor termoestabilidad y, por tanto, es más fácil de inactivar.

Características de la enzima
La enzima BMTU 3346 se inactiva más rápidamente (2 minutos a +95°C) que la correspondiente enzima de E. coli (10 minutos a +95°C). También se ha comunicado que la UNG de E. coli sigue parcialmente activa, lo que produce la degradación de los productos de la PCR que contienen dU. Por el contrario, la UNG termolábil no degrada los productos dU de la PCR como mínimo en varias horas de incubación entre +2 y +8°C. Por consiguiente, no es necesario congelar inmediatamente el producto de la PCR después de la amplificación ni mantener la mezcla de reacción a -70°C.

Especificidad

• La uracil-ADN glucosilasa hidroliza los enlaces uracil-glucosídicos en los sitios U-ADN del ADN monocatenario o bicatenario, cortando el uracilo y creando sitios abásicos sensibles a los álcalis en el ADN.
• La enzima es activa en ADN monocatenario y en ADN bicatenario.
• La uracil-ADN glucosilasa es inactiva en el ARN y el ADN nativo, carente de uracilo.
• Dado que la uracil-ADN glucosilasa no necesita iones metálicos, es completamente activa en presencia de EDTA.

Inactivación por calor: 95 °C durante 2 min

Aplicación

La uracil-ADN glucosilasa puede utilizarse para hidrolizar el ADN en cualquier sitio en el que se haya incorporado un residuo de desoxiuridilato.[1] Debido a la termolabilidad de la uracil-ADN glucosilasa, inestable al calor, la principal aplicación de esta enzima es la prevención de la contaminación por arrastre en la PCR. En contraste con la enzima procedente de E. coli, al utilizar esta preparación de UNG no es necesario congelar el producto de la PCR inmediatamente después de la amplificación ni mantener la mezcla de reacción a -70 °C.

Nota importante: Para técnicas de gran sensibilidad como la PCR en tiempo real, recomendamos nuestra uracil-ADN Glucosilasa LightCycler^® que está optimizada para esta aplicación.

Características y beneficios

• Evita la contaminación por arrastre en la PCR.
• Aumenta la eficacia de los procedimientos de mutagénesis específica de sitio.
• Etiqueta sondas de oligonucleóticos.
• Realiza una inactivación más rápida que la correspondiente enzima de E. coli debido a la menor termoestabilidad de la enzima.
• No produce degradación de los productos dU de la PCR como mínimo en varias horas de incubación entre +2 y +8°C.

Contenido
La enzima se suministra como una disolución 1 U/μl en tampón de conservación.

Calidad

Prueba de la función: La actividad de prevención del arrastre se valora añadiendo aproximadamente 105 dU que contenga las muestras antes de la reacción de amplificación. Después del tratamiento con UNG, no pudieron detectarse productos de amplificación.
La enzima no contiene exonucleasas ni endonucleasa contaminantes y carece de actividad ARNasa, según los procedimiento de control de calidad actuales.

Definición de unidad

Una unidad se define como la cantidad de uracil-ADN glucosilasa requerida para degradar por completo 1 μg de ADN monocatenario purificado que contenga uracilo (bacteriófago M13, crecimiento en E. coli CJ236 dut-ung-) a +37 °C en 60 minutos.
Una unidad Lindahl se define como la cantidad de enzima necesaria para liberar 1 mol de uracilo a +37 °C en 1 minuto. Según nuestra definición de unidad, una unidad Lindahl es comparable a 520 000 unidades.

Volumen de actividad: 1 U/μl

Otras notas

Para uso general de laboratorio.

Información legal

LightCycler is a registered trademark of Roche

Información de seguridad

• Frases de peligro: H412
• Consejos de prudencia: P273 - P501
• Clasificaciones de peligro: Aquatic Chronic 3
• Código de clase de almacenamiento: 12 - Non Combustible Liquids
• Clase de riesgo para el agua (WGK): WGK 2
• Punto de inflamabilidad (°F): does not flash
• Punto de inflamabilidad (°C): does not flash