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Kit de detección de muerte celular in situ, fluoresceína

sufficient for ≤50 tests, suitable for detection

• Sinónimos: Fluoresceína-12-UTP sal de tetralitio, Fluoresceína-5(6)-carboxamidocaproil-(5-[3-aminoalil]uridina 5′-trifosfato)
• Código UNSPSC: 12352200

Propiedades

• uso: sufficient for ≤50 tests
• Nivel de calidad: 100
• fabricante / nombre comercial: Roche
• técnicas: flow cytometry: suitable
• aplicaciones: detection
• temp. de almacenamiento: −20°C

Descripción

Descripción general

Kit para detección y cuantificación de la apoptosis al nivel celular basado en el marcaje de las roturas de la hebra de ADN (tecnología TUNEL); análisis mediante microscopia de fluorescencia o citometría de flujo.

Los métodos habitualmente utilizados para determinar la apoptosis consisten en el análisis del ADN genómico mediante electroforesis en gel de agarosa y los ensayos de fragmentación del ADN basados en la ³H-timidina y, alternativamente, la 5-bromo-2′-desoxiuridina. Los métodos consisten en separación de ADN fragmentado de bajo peso molecular del ADN no fragmentado de elevado peso molecular en una población celular dada. Por tanto, estos métodos no proporcionan información sobre el destino de una célula concreta de una población celular dada o, en particular, en cortes de tejido. Por otro lado, las células apoptóticas individuales pueden ser reconocidas microscópicamente por el aspecto característico de la condensación y la fragmentación de la cromatina nuclear, pero este método es subjetivo y está limitado a un margen temporal relativamente estrecho cuando los cambios morfológicos están en su máximo.
El signo patognomónico de la apoptosis es la degradación del ADN, que en las primeras etapas es selectiva para las regiones conectoras internucleosómicas del ADN. La escisión del ADN puede producir roturas (muescas) monocatenarias o bicatenarias del ADN. Ambos tipos de roturas pueden detectarse marcando los extremos 3′-OH terminales libres con nucleótidos modificados (por ejemplo, biotina-dUTP, DIG-dUTP, fluoresceína-dUTP) en una reacción enzimática. La enzima dexosinucleotidil transferasa terminal (TdT) cataliza la polimerización independiente de molde de los desoxirribonucleótidos al extremo 3′ del ADN monocatenario o bicatenario. Este método se ha denominado también TUNEL (del inglés TdT-mediated dUTP-X nick end labeling: marcaje del extremo de la muesca con dUTP-X mediado por la TdT). También pueden marcarse los grupos 3′-OH libres utilizando ADN polimerasas mediante el mecanismo dependiente de molde denominado traducción de muesca. Sin embargo, se considera que el método TUNEL es más sensible y rápido.

Especificidad

La reacción del método TUNEL marca de preferencia las roturas de la hebra de ADN generadas durante la apoptosis. Esto permite discriminar entre apoptosis y necrosis, y entre roturas de la hebra de ADN principal inducidas por citostáticos o irradiación.

Aplicación

El kit de detección de muerte celular in situ, fluoresceína,  es una técnica no radiactiva precisa, rápida y sencilla para detectar y cuantificar la muerte celular apoptótica al nivel celular mediante microscopia de fluorescencia y detección cuantitativa mediante citometría de flujo en las células y los tejidos. Por tanto, el kit de detección de muerte celular in situ puede utilizarse en muchos sistemas de análisis diferentes.
Son ejemplos:

• Detección de células apoptóticas individuales en cortes de tejido congelados y fijados en formalina en investigación básica
• Determinación de la sensibilidad de las células cancerosas a la apoptosis inducida por fármacos en la investigación del cáncer
• Tipado de las células que experimentan muerte celular en poblaciones heterogéneas mediante procedimientos de tinción doble

Características y beneficios

• Sensibilidad: el procedimiento de marcaje directo utilizando fluoresceína-dUTP reduce el marcaje de fondo
• Rapidez: el uso de fluoresceína-dUTP permite el análisis de las muestras directamente después de la reacción TUNEL
• Comodidad: no se precisa un sistema de detección secundario
• Precisión: Identificación de la apoptosis a un nivel molecular (roturas en la hebra de ADN) e identificación de las células en las primerísimas etapas de la apoptosis

Envase

1 kit que contiene 2 componentes.

Nota de preparación

Disolución de trabajo: Añadir el volumen total (50 μl) de la disolución enzimática a los 450 μl remanentes de la disolución de marcaje para obtener 500 μl de la mezcla de reacción TUNEL.
Mezclar bien para equilibrar los componentes.

Otras notas

Sólo para investigación en ciencias de la vida. No indicada para procedimientos diagnósticos.

Solo componentes del kit

• Enzyme Solution (TdT)
• Label Solution (fluorescein-dUTP)

Información de seguridad

• Pictogramas: GHS08,GHS09
• Palabra de señalización: Danger
• Frases de peligro: H350i,H411
• Consejos de prudencia: P201 - P273 - P280 - P308 + P313 - P391 - P501
• Clasificaciones de peligro: Aquatic Chronic 2 - Carc. 1B Inhalation
• Código de clase de almacenamiento: 6.1D - Non-combustible acute toxic Cat.3 / toxic hazardous materials or hazardous materials causing chronic effects
• Clase de riesgo para el agua (WGK): WGK 3
• Punto de inflamabilidad (°F): does not flash
• Punto de inflamabilidad (°C): does not flash