MAB5290
Anticuerpo anti-receptor D1A de la dopamina, clon SG2-D1a
clone SG2-D1a, Chemicon®, from mouse
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About This Item
Código UNSPSC:
12352203
eCl@ss:
32160702
NACRES:
NA.41
Productos recomendados
origen biológico
mouse
forma del anticuerpo
purified immunoglobulin
tipo de anticuerpo
primary antibodies
clon
SG2-D1a, monoclonal
reactividad de especies
mouse, sheep, rat
no debe reaccionar con
pig, rabbit, human, bovine, canine
fabricante / nombre comercial
Chemicon®
técnicas
immunohistochemistry: suitable
western blot: suitable
isotipo
IgG2b
Nº de acceso NCBI
Nº de acceso UniProt
Condiciones de envío
wet ice
modificación del objetivo postraduccional
unmodified
Información sobre el gen
human ... DRD1(1812)
Especificidad
Receptor D1A de la dopamina, sin reactividad cruzada con el receptor D1B (D5). Se encontró que la inmunorreactividad era específica del receptor D1A de ratón y de rata. Las muestras humanas, de cerdo, perro, conejo, oveja y bovino no fueron reactivas por análisis western.
Inmunógeno
Receptor D1A recombinante de rata, carboxi terminal.
Aplicación
Categoría de investigación
Neurociencia
Neurociencia
El anticuerpo anti-receptor D1A de la dopamina, clon SG2-D1a, detecta la concentración del receptor D1A de dopamina, y se ha publicado y validado para utilizar en IH e WB.
Inmunoelectrotransferencia (western blot): 1:250-1:500 en fracciones de membrana sin hervir de tejido caudado de rata. También se observa reactividad en la corteza prefrontal y temporal. Se observa una banda identificada entre 45 y 66 kDa (Luedtke, 1999).
Inmunohistoquímica: cortes en vibratomo, fijados con PFA al 4 %, bloqueados con NGS al 3 %, BSA al 1 % con triton X-100 al 0,2 %. Anticuerpos primarios diluidos en PBS con exceso de reactivos bloqueantes.
El usuario final debe determinar las diluciones de trabajo óptimas.
PROTOCOLO DE INMUNOELECTROTRANSFERENCIA SUGERIDO
Disoluciones
10X Tampón de transferencia 1 litro
Tris 115,3 gm
Glicina 24,2 gm
[SDS 4 gm (puede omitirse)]
Para la disolución de trabajo 1X: 1 litro
mezcla 700 ml de agua
200 ml de MeOH
100 ml 10X TransferTBST
stock 1 litro
Tris 1M pH 7,5 10 ml
NaC 5 M 30 ml
10 % Tween-20 5 ml
1. Correr el gel de SDS-PAGE como se desee.
2. Remojar la membrana de PVDF (ImmobilonP de Millipore) en metanol al 100 % durante 1-2 minutos para mojar la membrana.
3. Remojar la membrana en el tampón de transferencia (véase más adelante) hasta que esté lista para configurar la transferencia (>15 min).
4. Montar el sándwich de transferencia en gel con la transferencia hacia el electrodo positivo.
5. Transferir la proteína del gel a la membrana a 100 voltios durante 1-2 horas para proteínas de poco peso molecular o 65 mA durante 16 horas (durante la noche) para la transferencia completa de proteínas de mayor peso molecular.
6. Teñir las bandas transferidas con Chemicon BLOT-FastStain (Número de referencia 2076).
7. Desteñir con agua desionizada.
8. Bloquear con leche desnatada al 5 % (Marvel o Clavel) en TBS o PBS, durante la noche a 4°C. La leche desnatada debe disolverse recién preparada, centrifugarse a 10 000 rpm durante 10 min y filtrarse a través de un filtro de vidrio (Gelman Acrodisc).
9. Incubar con el primer anticuerpo durante la noche con agitación suave a 4°C.
El usuario final deberá determinar las diluciones de trabajo óptimas y el tiempo de incubación.
10. Lavar por lo menos 3 x 5 minutos con TBST. A partir de esta etapa, debe omitirse la azida.
11. Incubación con el anticuerpo secundario (anticuerpo de cabra anti-ratón conjugado con HRP, por ejemplo, Chemicon Número de referencia AP124P, diluido adecuadamente) 1 h a temperatura ambiente.
12. Lavar por lo menos 3 x 5 minutos con TBST.
13. Realizar ECL con un kit comercial (femtoLUCENT, Chemicon, número de referencia 2078).
Inmunohistoquímica: cortes en vibratomo, fijados con PFA al 4 %, bloqueados con NGS al 3 %, BSA al 1 % con triton X-100 al 0,2 %. Anticuerpos primarios diluidos en PBS con exceso de reactivos bloqueantes.
El usuario final debe determinar las diluciones de trabajo óptimas.
PROTOCOLO DE INMUNOELECTROTRANSFERENCIA SUGERIDO
Disoluciones
10X Tampón de transferencia 1 litro
Tris 115,3 gm
Glicina 24,2 gm
[SDS 4 gm (puede omitirse)]
Para la disolución de trabajo 1X: 1 litro
mezcla 700 ml de agua
200 ml de MeOH
100 ml 10X TransferTBST
stock 1 litro
Tris 1M pH 7,5 10 ml
NaC 5 M 30 ml
10 % Tween-20 5 ml
1. Correr el gel de SDS-PAGE como se desee.
2. Remojar la membrana de PVDF (ImmobilonP de Millipore) en metanol al 100 % durante 1-2 minutos para mojar la membrana.
3. Remojar la membrana en el tampón de transferencia (véase más adelante) hasta que esté lista para configurar la transferencia (>15 min).
4. Montar el sándwich de transferencia en gel con la transferencia hacia el electrodo positivo.
5. Transferir la proteína del gel a la membrana a 100 voltios durante 1-2 horas para proteínas de poco peso molecular o 65 mA durante 16 horas (durante la noche) para la transferencia completa de proteínas de mayor peso molecular.
6. Teñir las bandas transferidas con Chemicon BLOT-FastStain (Número de referencia 2076).
7. Desteñir con agua desionizada.
8. Bloquear con leche desnatada al 5 % (Marvel o Clavel) en TBS o PBS, durante la noche a 4°C. La leche desnatada debe disolverse recién preparada, centrifugarse a 10 000 rpm durante 10 min y filtrarse a través de un filtro de vidrio (Gelman Acrodisc).
9. Incubar con el primer anticuerpo durante la noche con agitación suave a 4°C.
El usuario final deberá determinar las diluciones de trabajo óptimas y el tiempo de incubación.
10. Lavar por lo menos 3 x 5 minutos con TBST. A partir de esta etapa, debe omitirse la azida.
11. Incubación con el anticuerpo secundario (anticuerpo de cabra anti-ratón conjugado con HRP, por ejemplo, Chemicon Número de referencia AP124P, diluido adecuadamente) 1 h a temperatura ambiente.
12. Lavar por lo menos 3 x 5 minutos con TBST.
13. Realizar ECL con un kit comercial (femtoLUCENT, Chemicon, número de referencia 2078).
Subcategoría de investigación
Neurotransmisores y receptores
Neurotransmisores y receptores
Forma física
Inmunoglobulina purificada. Líquido en fosfato de potasio 0,02 M, NaCl 0,25 M, pH 7,6 con azida sódica al 0,1%.
Presentación: Purificada
Almacenamiento y estabilidad
Mantener entre 2 y 8°C en alícuotas no diluidas durante un máximo de 6 meses después de la fecha de recepción.
Otras notas
Concentración: Para conocer la concentración específica del lote, consulte el certificado de análisis.
Información legal
CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
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Código de clase de almacenamiento
10 - Combustible liquids
Clase de riesgo para el agua (WGK)
WGK 2
Punto de inflamabilidad (°F)
Not applicable
Punto de inflamabilidad (°C)
Not applicable
Certificados de análisis (COA)
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