HTS185M
Receptor prostanoide recombinante humano EP2 Preparación de membranas ChemiSCREEN
Human EP2 GPCR membrane preparation for Radioligand binding Assays & GTPγS binding.
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About This Item
Código UNSPSC:
41106514
eCl@ss:
32161000
NACRES:
NA.41
origen biológico
human
Nivel de calidad
recombinante
expressed in Chem-1 cells
fabricante / nombre comercial
ChemiScreen
Chemicon®
técnicas
ligand binding assay: suitable (GTPγS)
radioligand binding assay (RLBA): suitable
Nº de acceso NCBI
Nº de acceso UniProt
Condiciones de envío
dry ice
Información sobre el gen
human ... PTGER2(5732)
Descripción general
ADNc PTGER2 humano completo que codifica el EP2
Los prostanoides se unen a una familia de 8 GPCR (receptores acoplados a la proteína G) para ejercer sus efectos biológicos (Narumiya y Fitzgerald, 2001). El prostanoide PGE2 causa dolor, vasodilatación, inmunodepresión de células T, resorción ósea y promoción de la carcinogénesis. Cuatro GPCR relacionados, EP1, EP2, EP3 y EP4, se une cada uno a la PGE2, pero el diferente estado de acoplamiento a la proteína G de cada receptor induce distintos efectos biológicos. El EP2 se acopla principalmente a G para aumentar los niveles intracelulares de AMPc. Los ratones con deficiencia del receptor EP2 mostraron un deterioro de la ovulación y la fertilización, e hipertensión sensible a la sal (Kennedy et al., 1999). Se ha demostrado que los receptores EP2 están involucrados también en la inmunodeficiencia asociada al cáncer. Por lo tanto, la supresión genética del receptor EP2 redujo el crecimiento tumoral y prolongó la supervivencia en ratones que habían recibido una inyección de isoinjerto de células de carcinoma pulmonar MC26 o Lewis (Yang et al., 2003). Las preparaciones de membrana con EP2 de Millipore son preparaciones de membrana crudas obtenidas a partir de nuestras líneas celulares recombinantes estables patentadas para garantizar un alto nivel de expresión de superficie de GPCR; por lo tanto, son herramientas de HTS (cribado de alto rendimiento) ideales para el cribado de agonistas y antagonistas del EP2. Los preparados de membrana presentan una Kd de 14,52 Nm para la [3H]-PGE2. Con [3H]-PGE2 7,5 nM, 10 µg/pocillo de preparación de membrana EP2 producen normalmente una relación señal-fondo superior al triple.
Aplicación
Preparación de membranas con GPCR EP2 humano para ensayos de unión de radioligandos y unión de GTPγS.
Calidad
Tabla 1. Valores de señal:fondo y de unión específica obtenidos en un ensayo de unión competitiva con cantidades variables de preparación de receptor de membrana EP2 .
1 unidad = 10 µg
Bmax para la unión al [3H]-PGE2 : 4,38 pmol/mg de proteína
Kd para la unión de [3H]-PGE2 : ~14,52 nM
| 10 µg/pocillo | |
|---|---|
| Señal:fondo | 3,60 |
| Unión específica (cpm) | 1146 |
1 unidad = 10 µg
Bmax para la unión al [3H]-PGE2 : 4,38 pmol/mg de proteína
Kd para la unión de [3H]-PGE2 : ~14,52 nM
Especificaciones
Condiciones de incubación
Las membranas se mezclan con un ligando radiactivo y un competidor no marcado (en las figuras 1 y 2 encontrará las concentraciones probadas) en tampón de unión en una placa de 96 pocillos no ligante y es incuban durante 1-2 h. Antes de la filtración, se recubre una placa de filtración de 96 pocillos GF/C con polietilenimina al 0,33 % durante 30 min, y luego se lava con HEPES 50 mM, pH 7,4, NaCl 500 mM. La reacción de fijación se transfiere a la placa de filtración y se lava 3 veces (1 ml por pocillo por lavado) con tampón de lavado. La placa se seca y se cuenta.
Tampón de unión: Hepes 50 mM, pH 7.4, MgCl2 5 mM, CaCl2 1 mM, filtrado y conservado a 4°C.
Radioligando: [3H]-PGE2 (Perkin Elmer#: NET-428)
Tampón de lavado: HEPES 50 mM, pH 7,4, NaCl 500 mM, filtrado y conservado a 4°C.
Las membranas se mezclan con un ligando radiactivo y un competidor no marcado (en las figuras 1 y 2 encontrará las concentraciones probadas) en tampón de unión en una placa de 96 pocillos no ligante y es incuban durante 1-2 h. Antes de la filtración, se recubre una placa de filtración de 96 pocillos GF/C con polietilenimina al 0,33 % durante 30 min, y luego se lava con HEPES 50 mM, pH 7,4, NaCl 500 mM. La reacción de fijación se transfiere a la placa de filtración y se lava 3 veces (1 ml por pocillo por lavado) con tampón de lavado. La placa se seca y se cuenta.
Tampón de unión: Hepes 50 mM, pH 7.4, MgCl2 5 mM, CaCl2 1 mM, filtrado y conservado a 4°C.
Radioligando: [3H]-PGE2 (Perkin Elmer#: NET-428)
Tampón de lavado: HEPES 50 mM, pH 7,4, NaCl 500 mM, filtrado y conservado a 4°C.
Información legal
CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
Código de clase de almacenamiento
12 - Non Combustible Liquids
Clase de riesgo para el agua (WGK)
WGK 2
Punto de inflamabilidad (°F)
Not applicable
Punto de inflamabilidad (°C)
Not applicable
Certificados de análisis (COA)
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C R Kennedy et al.
Nature medicine, 5(2), 217-220 (1999-02-04)
Prostaglandins (PGs) are ubiquitous lipid mediators derived from cyclooxygenase metabolism of arachidonic acid that exert a broad range of physiologic activities, including modulation of inflammation, ovulation and arterial blood pressure. PGE2, a chief cyclooxygenase product, modulates blood pressure and fertility
Cancer-associated immunodeficiency and dendritic cell abnormalities mediated by the prostaglandin EP2 receptor
Yang, Li, et al
The Journal of Clinical Investigation, 111, 727-735 (2003)
Nuestro equipo de científicos tiene experiencia en todas las áreas de investigación: Ciencias de la vida, Ciencia de los materiales, Síntesis química, Cromatografía, Analítica y muchas otras.
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