This product is not specifically tested for use in 'cell culture', however it is tested for cell dissociation. The testing falls into the broad scope of cell culture in that the product is not cytotoxic and is enzymatically capable of preparing a single cell suspension. Details may be review in the PROPERTIES section as well as the Certificate of Analysis. See the link below to review a sample document:
https://www.sigmaaldrich.com/certificates/sapfs/PROD/sap/certificate_pdfs/COFA/Q14/C2674-100MG0000227617.pdf
C2674
Colagenasa from Clostridium histolyticum
lyophilized powder, ≥125 CDU/mg solid (CDU = collagen digestion units), 0.5-5.0 FALGPA units/mg solid
Sinónimos:
Clostridiopeptidasa A
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About This Item
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Productos recomendados
origen biológico
Clostridium histolyticum
Nivel de calidad
tpo
Type I-A
Formulario
lyophilized powder
actividad específica
≥125 CDU/mg solid (CDU = collagen digestion units)
0.5-5.0 FALGPA units/mg solid
mol peso
68-130 kDa
concentración
1 mg/mL
técnicas
cell culture | mammalian: suitable
single cell analysis: suitable
pH
6.3-8.8
Condiciones de envío
ambient
temp. de almacenamiento
−20°C
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Descripción general
La colagenasa es una proteasa que rompe la triple hélice proteica denominada colágeno. Hay tres tipos de colagenasas en los tejidos, que pertenecen a la familia de las metaloproteinasas de la matriz extracelular (MMP).[1] La colagenasa obtenida de Clostridium histolyticum tiene una actividad muy fuerte, ya que digiere el colágeno desde ambos extremos a temperaturas de tan sólo 4-10°C.[2] Las mezclas de colagenasa cruda contienen dos tipos principales de enzima, colagenasa y clostripaína.[3]
Aplicación
La colagenasa de Clostridium histolyticum se utiliza para las siguientes aplicaciones:
Este producto es adecuado para la desagregación de tumores humanos, riñones de ratón, cerebro adulto y fetal, pulmón y muchos otros tejidos epiteliales. También se ha demostrado su eficacia en los estudios de perfusión del hígado y el riñón, digestión del páncreas, aislamiento de las células hepáticas no parenquimatosas de rata y en la preparación de hepatocitos. La colagenasa se ha utilizado también para la preparación de tejido arterial para el estudio de los productos finales de glucosilación avanzada. Se ha estudiado esta enzima para la liberación de hepatocitos a una concentración aproximada de 1 mg/ml. Las concentraciones para digestión oscilan entre 0,1 y 5 mg/ml.
Adecuada para utilizar en la preparación de suspensión monocelular para secuenciación.
- Aislamiento de las células de Sertoli[4]
- Utilizada en la comparación de métodos enzimáticos[5]
- Utilizada durante las preparaciones de tejidos para inmunocitoquímica[6]
- Extracción testicular de esperma[7]
- Preparación de suspensiones monocelulares[8]
- Inmunofluorescencia[9]
Este producto es adecuado para la desagregación de tumores humanos, riñones de ratón, cerebro adulto y fetal, pulmón y muchos otros tejidos epiteliales. También se ha demostrado su eficacia en los estudios de perfusión del hígado y el riñón, digestión del páncreas, aislamiento de las células hepáticas no parenquimatosas de rata y en la preparación de hepatocitos. La colagenasa se ha utilizado también para la preparación de tejido arterial para el estudio de los productos finales de glucosilación avanzada. Se ha estudiado esta enzima para la liberación de hepatocitos a una concentración aproximada de 1 mg/ml. Las concentraciones para digestión oscilan entre 0,1 y 5 mg/ml.
Adecuada para utilizar en la preparación de suspensión monocelular para secuenciación.
Acciones bioquímicas o fisiológicas
La colagenasa es activada por cuatro átomo-gramos de calcio por mol de enzima. Es inhibida por el ácido etilenglicol-bis(beta-aminoetil éter) - N, N, N′,N′-tetraacético, el beta-mercaptoetanol, el glutatión, el ácido tioglicólico y la 8-hidroxiquinolina.
La colagenasa es una mezcla de enzimas secretadas por C. histolyticum y los diferentes productos se diferencian por las proporciones relativas de los 10-18 componentes que se encuentran en las enzimas secretadas. Los principales componentes son dos colagenasas, la clostripaína y una proteasa neutra. La acción sinérgica de esas enzimas degrada el colágeno y otro material intracelular. La acción de las dos colagenasas y la proteasa neutra es necesaria para la separación efectiva de las células del tejido. Los sustratos naturales para la colagenasa son varios tipos de colágeno.
Precaución
Tal como se suministra, este producto es estable durante un año a -20°C. No hay pérdida de actividad FALGPA ni actividad proteasa en 30 días a 37°C, 50°C y -20°C. Las disoluciones de colagenasa cruda son estables si se congelan rápidamente en alícuotas (a 10 mg/ml) y se conservan congeladas a -20°C. Otros ciclos de congelación-descongelación dañarán la disolución. El producto retiene el 100 % de su actividad durante 7 horas si se conserva en hielo.
Definición de unidad
Una unidad de digestión de colágeno (CDU) libera péptidos del colágeno del tendón de Aquiles bovino que equivalen en la reacción de color de la ninhidrina a 1,0 μmoles de leucina en 5 horas a pH 7,4 y 37 °C en presencia de iones calcio. Una unidad de hidrólisis FALGPA hidroliza 1,0 μmoles de furilacriloil-Leu-Gly-Pro-Ala por minuto a 25°C. Una unidad de proteasa neutra hidroliza la caseína para producir color equivalente a 1,0 μmoles de tirosina por 5 horas a pH 7,5 y 37°C. Una unidad de clostripaína hidroliza 1,0 μmoles de BAEE por minuto a pH 7,6 y 25°C en presencia de DTT.
Nota de preparación
Esta colagenasa se obtiene del filtrado del cultivo de Clostridium histolyticum. Se piensa que el cultivo filtrado contiene como mínimo 7 proteasas diferentes cuyos pesos moleculares oscilan entre 68 y 130 kDa. Este producto es el tipo I-A. Las disoluciones se preparan normalmente a 1-2 mg/ml en tampón TESCA (que contiene TES 50 mM, cloruro de calcio 0,36 mM, pH 7,4 y 37°C.)
sustrato
Referencia del producto
Descripción
Precios
Palabra de señalización
Danger
Frases de peligro
Consejos de prudencia
Clasificaciones de peligro
Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
Órganos de actuación
Respiratory system
Código de clase de almacenamiento
11 - Combustible Solids
Clase de riesgo para el agua (WGK)
WGK 1
Punto de inflamabilidad (°F)
Not applicable
Punto de inflamabilidad (°C)
Not applicable
Equipo de protección personal
dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves
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Protocolos
To measure collagenase activity, N-(3-[2-Furyl]acryloyl)-Leu-Gly-Pro-Ala is used in a continuous spectrophotometric rate determination at 345 nm. Collagenase hydrolyzes collagen peptide bonds.
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