ABN249

Anticuerpo anti-aductos HNE Michael reducidos

serum, from rabbit

• Sinónimos: Reduced 4-hydroxy-trans-2-nonenal Michael adducts, Reduced HNE Michael adducts
• UNSPSC Code: 12352203
• NACRES: NA.41
• eCl@ss: 32160702
• Clone: polyclonal
• Species reactivity: bovine, human
• Application: WB
• Citations: 3

Propiedades

• biological source: rabbit
• Quality Segment: 100
• antibody form: serum
• antibody product type: primary antibodies
• clone: polyclonal
• species reactivity: bovine, human
• technique(s): western blot: suitable
• shipped in: ambient
• target post-translational modification: unmodified

Descripción

General description

Los aldehídos reactivos generados durante la peroxidación lipídica contribuyen al daño celular y tisular asociado con el estrés oxidativo. Los compuestos carbonilo alfa, beta-insaturados como el 4-hidroxi-2-nonenal (HNE), el 4-oxo-2-nonenal (ONE) y la acroleína, generados por la oxidación de los ácidos grasos poliinsaturados (PUFA), interactúan fácilmente con los grupos nucleófilos de las proteínas, lo que induce la reticulación intramolecular o intermolecular de las proteínas. Existen dos tipos de modificaciones del HNE, el primer tipo se forma por la reacción de un aducto de Michael 1:1 con lisina amina, histina imidazol o sulfhidrilo de cisteína, mientras que el segundo tipo es producido por un HNE que reacciona simultáneamente con dos grupos amina libres de dos N-alfa-acetilisinas (NALS), el llamado aducto Michael-base de Schiff. En este último caso, el aducto inicial no fluorescente 2:1 lisina-HNE Michael base de Schiff se somete luego a una ciclación oxidativa para formar un derivado fluorescente 2-hidroxi-3-imino-1,2-dihidropirrol comúnmente conocido como fluoróforo HNE. El aducto de HNE-Lys Michael formado de manera reversible no es estable, y suele emplearse la reducción por borohidruro sódico (NaBH4) para preservar la modificación Lys HNE en las muestras proteicas. La estabilización reductiva por tratamiento con NaBH4 se utiliza también para prevenir la pérdida del 4-HNE del aducto de 4-HNE-Cys Michael por reacción retro-Michael de adición (RMA) durante la disociación inducida por colisión (CID) y la disociación por transferencia de electrones (ETD) MS/MS.

Variable, dependiendo de los tamaños de las proteínas HNE-modificadas. En algunos lisados pueden observarse bandas no caracterizadas.

Immunogen

KLH modificado por HNE químicamente reducido por borohidruro de sodio.

Application

El anticuerpo anti-aductos HNE Michael reducidos, Nº de ref. ABN249, es un anticuerpo policlonal de conejo muy específico que se dirige a la forma reducida de los aductos 4-hidroxi-2-noneal Michael y se ha probado en Western Blotting.

Notas de aplicación:
1. ABN249 sustituye a Calbiochem 393207. Se espera que el ABN249 funcione en inmunocitoquímica e inmunohistoquímica. Consulte las siguientes citas 393207como ejemplos de preparaciones de muestras y detección en estos dos tipos de aplicaciones:

Usatyuk, P.V., et al. (2006). J. Biol. Chem. 281(46):35554-35566 (Inmunocitoquímica).
McCormack, A.L., et al. (2005). J. Neurochem. 93( 4): 1030- 1037 (inmunohistoquímica).

2. También se dispone de un anti-HNE fluoróforo, Nº de ref. 393206, para la detección del HNE fluoróforo por ELISA, inmunohistoquímica e inmunoelectrotransferencia.

3. Para generar un control positivo para inmunoelectrotransferencia (western blot) hay que tratar una disolución de 2 mg/ml de BSA en KH2PO4 10 mM, pH 7,4, con HNE 0,1 a 0,5 mM e incubar durante 1 h a 37°C. La reacción puede controlarse por la disminución de la absorbancia de HNE a 224 nm (coeficiente de extinción 13,750/M). El HNE libre puede eliminarse por filtración en gel y diálisis después de la reacción química.

Los aductos HNE Michael formados en las disoluciones proteicas deben reducirse químicamente con borohidruro de sodio (NaBH4) antes del análisis utilizando ABN1348. Se añade una disolución de NaBH4 100 mM recién preparada en NaOH 1 mM 1:9 (V:V) a la disolución de muestra proteica hasta una concentración final de NaBH4 10 mM. La disolución proteica se mantiene a temperatura ambiente durante 10 a 30 minutos antes del enfriamiento con la adición de 5 a 10 equivalentes molares de acetona.

Biochem/physiol Actions

Este antisuero policlonal detectó BSA modificado por HNE solo después, pero no antes, de la reducción por borohidruro de sodio.

La modificación de la diana no es específica de especie.

Analysis Note

Control
BSA modificado por HNE químicamente reducido por borohidruro de sodio.

Evaluada mediante inmunotransferencia Western en HNE-BSA reducido.

Análisis mediante inmunoelectrotransferencia (western blot): una dilución 1:10 000 de este anticuerpo detectó 10 ng de BSA modificado con HNE solo después, pero no antes, de la reducción por borohidruro de sodio.

Other Notes

Concentración: Consulte la ficha técnica específica del lote.

Sustituye a: Calbiochem 393207

Información de seguridad

• Clase de almacenamiento: 12 - Non Combustible Liquids
• ¿Qué está pasando?: WGK 1
• Punto de inflamación (°F): Not applicable
• Punto de inflamación (°C): Not applicable