17-648
ChiPAb+ dimetil-histona H3 (Lys9): Conjunto de anticuerpo y cebador validado para CHIP
serum, from rabbit
Sinónimos:
H3K9me2, Histone H3 (di methyl K9), Histone H3K9me2
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Acerca de este artículo
UNSPSC Code:
12352203
NACRES:
NA.52
eCl@ss:
32160702
Clone:
polyclonal
Species reactivity:
human, mouse
Application:
ChIP, IP, WB
Citations:
39
Servicio técnico
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Permítanos ayudarlebiological source
rabbit
Quality Segment
antibody form
serum
clone
polyclonal
species reactivity
human, mouse
species reactivity (predicted by homology)
mammals
manufacturer/tradename
ChIPAb+, Upstate®
technique(s)
ChIP: suitable, immunoprecipitation (IP): suitable, western blot: suitable
NCBI accession no.
UniProt accession no.
shipped in
dry ice
Gene Information
human ... H3F3B(3021)
General description
17 kDa
La metilación de las histonas puede ocurrir en dos residuos diferentes: arginina o lisina. La metilación de la histona puede estar asociada con la activación o la represión de la transcripción, dependiendo del residuo metilado. La lisina 9 de la histona H3 puede puede estar mono, di o trimetilada por diferentes histona metiltransferasas (HMT) como la SuvH39H1 o la G9a. Esta lisina metilada puede ser desmetilada por histona desmetilasas como la JMJD1A, la LSD1 o la JMJD2C. La metilación de este residuo se asocia principalmente con la represión de la transcripción.
Todos los anticuerpos ChiPAb+ se validan individualmente para la precipitación de cromatina, en cada lote y en todo momento. Cada conjunto de anticuerpos ChiPAb+ incluye cebadores de control (probados en cada lote mediante qPCR) para validar biológicamente los resultados de IP en un contexto específico de locus. Se proporcionan el protocolo de qPCR y las secuencias de los cebadores, lo que permite a los investigadores validar los protocolos de ChIP al utilizar nuestro anticuerpo en su contexto de cromatina. Cada conjunto incluye también un anticuerpo de control negativo para garantizar la especificidad de la reacción de ChIP.
El conjunto ChiPAb+ dimetil-histona H3 (Lys9) incluye el anticuerpo anti-dimetil-histona H3 (Lys9), un anticuerpo de control negativo (suero de conejo normal) y cebadores de qPCR que amplifican una región de 110 pares de bases dentro del promotor del gen la β-globina humana. Los anticuerpos anti-dimetil-histona H3 (Lys9) y controles negativos se suministran en un tamaño de reacción escalable «por ChIP» y pueden utilizarse para validar funcionalmente la precipitación de la cromatina asociada a la dimetil-histona H3 (Lys9).
El conjunto ChiPAb+ dimetil-histona H3 (Lys9) incluye el anticuerpo anti-dimetil-histona H3 (Lys9), un anticuerpo de control negativo (suero de conejo normal) y cebadores de qPCR que amplifican una región de 110 pares de bases dentro del promotor del gen la β-globina humana. Los anticuerpos anti-dimetil-histona H3 (Lys9) y controles negativos se suministran en un tamaño de reacción escalable «por ChIP» y pueden utilizarse para validar funcionalmente la precipitación de la cromatina asociada a la dimetil-histona H3 (Lys9).
Immunogen
El suero de conejo dimetil-histona H3 (Lys9) se elabora contra un péptido sintético ramificado que contiene la secuencia ..Rme2KSTG.., en la que me2K corresponde a la dimetil-lisina en el resto 9 de la histona humana H3, conjugado con KLH
Epítopo: Dimetil Lys9
Application
Categoría de investigación
Epigenética y función nuclear
Epigenética y función nuclear
Inmunoprecipitación de la cromatina:
La cromatina tratada con ultrasonidos preparada partir de células HeLa no tratadas (1 X 106 equivalentes de célula) se sometió a inmunoprecipitación utilizando 4 μl de antisuero de conejo sano o suero antidimetilhistona H3 (Lys9) y el kit Magna ChIP A (Nº de ref. 17-610) (Consulte las figuras). La inmunoprecipitación exitosa de fragmentos de ADN asociados con dimetil-histona H3 (Lys9) se verificó mediante qPCR utilizando cebadores de β-globina para ChIP que flanquean el promotor de la β-globina humana o cebadores que amplifican el promotor de la GAPDH humana, que está transcripcionalmente inactivo en las células HeLa. Se muestra el porcentaje de entrada en relación con las curvas patrón para cada conjunto de cebadores de qPCR.
Consulte los detalles experimentales en el protocolo EZ-Magna A ChIP
Análisis de inmunotransferencia Western e inhibición de péptidos:
el extracto ácido de HeLa se resolvió mediante electroforesis, se transfirió a nitrocelulosa y se probó con anti-dimetil-histona H3 (Lys9) (1:500, carril 1) o se preincubó con péptido histona H3 0,4 μM con las siguientes modificaciones:
Carril 2: Lineal no modificada
Carril 3: Ramificado no modificado
Carril 4: Trimetil ramificado
Carril 5: Trimetil lineal
Carril 6: Dimetil ramificado
Carril 7: Dimetil lineal
Carril 8: Monometil ramificado
Carril 9: Monometil lineal
Las proteínas se visualizaron utilizando una anticuerpo secundario de cabra anti–conejo conjugado con HRP y un sistema de detección de quimioluminiscencia.
La cromatina tratada con ultrasonidos preparada partir de células HeLa no tratadas (1 X 106 equivalentes de célula) se sometió a inmunoprecipitación utilizando 4 μl de antisuero de conejo sano o suero antidimetilhistona H3 (Lys9) y el kit Magna ChIP A (Nº de ref. 17-610) (Consulte las figuras). La inmunoprecipitación exitosa de fragmentos de ADN asociados con dimetil-histona H3 (Lys9) se verificó mediante qPCR utilizando cebadores de β-globina para ChIP que flanquean el promotor de la β-globina humana o cebadores que amplifican el promotor de la GAPDH humana, que está transcripcionalmente inactivo en las células HeLa. Se muestra el porcentaje de entrada en relación con las curvas patrón para cada conjunto de cebadores de qPCR.
Consulte los detalles experimentales en el protocolo EZ-Magna A ChIP
Análisis de inmunotransferencia Western e inhibición de péptidos:
el extracto ácido de HeLa se resolvió mediante electroforesis, se transfirió a nitrocelulosa y se probó con anti-dimetil-histona H3 (Lys9) (1:500, carril 1) o se preincubó con péptido histona H3 0,4 μM con las siguientes modificaciones:
Carril 2: Lineal no modificada
Carril 3: Ramificado no modificado
Carril 4: Trimetil ramificado
Carril 5: Trimetil lineal
Carril 6: Dimetil ramificado
Carril 7: Dimetil lineal
Carril 8: Monometil ramificado
Carril 9: Monometil lineal
Las proteínas se visualizaron utilizando una anticuerpo secundario de cabra anti–conejo conjugado con HRP y un sistema de detección de quimioluminiscencia.
Juego de anticuerpo y cebador validados para ChIP de dimetil-histona H3 (Lys9), que incluye el anticuerpo de calidad ChIP y los cebadores específicos de control de PCR utilizados para la inmunoprecipitación de cromatina de H3K9Me2.
Subcategoría de investigación
Biología de la cromatina
Biología de la cromatina
Biochem/physiol Actions
Dimetil-histona H3 (Lys9)
Packaging
25 análisis por kit, ~4 μl por inmunoprecipitación de la cromatina
Physical form
Dimetil-histona H3 (Lys9) (suero policlonal de conejo). Un vial que contiene 100 μl de antisuero con azida sódica al 0,05 %.
Suero de conejo sano. Un vial que contiene 100 µl de antisuero con azida sódica al 0,05 %.
Cebadores para ChIP, β-globina. Un vial que contiene 75 μl de 5 μM de cada cebador específico para la β-globina humana.
(DIR). AGG ACA GGT ACG GCT GTC ATC
INV: TTT ATG CCC AGC CCT GGC TC
Suero de conejo sano. Un vial que contiene 100 µl de antisuero con azida sódica al 0,05 %.
Cebadores para ChIP, β-globina. Un vial que contiene 75 μl de 5 μM de cada cebador específico para la β-globina humana.
(DIR). AGG ACA GGT ACG GCT GTC ATC
INV: TTT ATG CCC AGC CCT GGC TC
Preparation Note
Estable durante 1 año a -20°C desde la fecha de recepción.
Analysis Note
Control
Incluyó suero de conejo sano con anticuerpo de control negativo y cebadores de control específicos para el promotor de la β-globina humana.
Incluyó suero de conejo sano con anticuerpo de control negativo y cebadores de control específicos para el promotor de la β-globina humana.
Inmunoprecipitación de cromatina:
La cromatina tratada con ultrasonidos a partir de células HeLa no tratadas (1 X 106 equivalentes de células) se sometió a inmunoprecipitación utilizando 4 μl de un antisuero de conejo normal o 4 μl de suero anti-dimetil-histona H3 (Lys9) y el kit Magna ChIP A (Nº de ref. 17-610).
La inmunoprecipitación satisfactoria de fragmentos de ADN asociados a la dimetil histona H3 (Lys9) se verificó mediante qPCR utilizando cebadores para ChIP de control que flanqueaban el promotor de la β-globina humana (consulte las figuras).
La cromatina tratada con ultrasonidos a partir de células HeLa no tratadas (1 X 106 equivalentes de células) se sometió a inmunoprecipitación utilizando 4 μl de un antisuero de conejo normal o 4 μl de suero anti-dimetil-histona H3 (Lys9) y el kit Magna ChIP A (Nº de ref. 17-610).
La inmunoprecipitación satisfactoria de fragmentos de ADN asociados a la dimetil histona H3 (Lys9) se verificó mediante qPCR utilizando cebadores para ChIP de control que flanqueaban el promotor de la β-globina humana (consulte las figuras).
Other Notes
Anti-dimetilhistona H3 (Lys9) (suero de conejo), 1 vial
Suero de control para ChIP negativo, 1 vial
Cebadores ChIP para β-globina, 1 vial
Suero de control para ChIP negativo, 1 vial
Cebadores ChIP para β-globina, 1 vial
Legal Information
UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
Disclaimer
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