Collagenase would be soluble in PBS, however it is recommended to dissolve the enzyme in TESCA buffer containing 50 mM TES, 0.36 mM Calcium chloride. Aliquotes may be stored up to 1 year at -20°C. Avoid repeated freeze thaw cycles. Please see the link below to the product information sheet for additional details.
https://www.sigmaaldrich.com/deepweb/assets/sigmaaldrich/product/documents/321/500/c6885pis.pdf
C6885
Collagénase from Clostridium histolyticum
suitable for release of physiologically active rat epididymal adipocytes, Type II, 0.5-5.0 FALGPA units/mg solid, ≥125 CDU/mg solid
Synonyme(s) :
Clostridiopeptidase A
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A propos de cet article
Numéro CAS:
UNSPSC Code:
12352204
NACRES:
NA.54
EC Number:
232-582-9
MDL number:
Specific activity:
≥125 CDU/mg solid, 0.5-5.0 FALGPA units/mg solid
Biological source:
Clostridium histolyticum
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Clostridium histolyticum
form
powder
specific activity
≥125 CDU/mg solid, 0.5-5.0 FALGPA units/mg solid
suitability
suitable for release of physiologically active rat epididymal adipocytes
application(s)
diagnostic assay manufacturing
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wet ice
storage temp.
−20°C
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| specific activity ≥125 CDU/mg solid, 0.5-5.0 FALGPA units/mg solid | specific activity ≥125 CDU/mg solid, 0.5-5.0 FALGPA units/mg solid | specific activity ≥125 CDU/mg solid, 0.5-5.0 FALGPA units/mg solid | specific activity ≥125 CDU/mg solid, 0.5-5.0 FALGPA units/mg solid |
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| suitability suitable for release of physiologically active rat epididymal adipocytes | suitability - | suitability - | suitability suitable for release of physiologically active rat hepatocytes |
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| storage temp. −20°C | storage temp. −20°C | storage temp. −20°C | storage temp. −20°C |
General description
Clostridium histolyticum est un clostridium pathogène qui produit de la collagénase. Il s′agit d′un mélange enzymatique contenant de la collagénase, des protéases non spécifiques et de la clostripaïne.[1]
Application
La collagénase peut être utilisée : [1]
- Dans la préparation de tissu artériel pour l′étude des produits finaux de glycosylation avancée (AGE).
- En association avec d′autres protéases, pour la désagrégation de tissus de tumeur humaine, de rein de souris, de cerveau humain, d′épithélium de poumon et de nombreux autres types.
- Dans des études de perfusion de foie et de rein, de digestion de pancréas et d′isolement d′hépatocytes non parenchymateux.
- Pour la préparation d′hépatocytes viables à partir de foie de rat et pour l′isolement d′adipocytes à partir de tissu adipeux de rat.
Biochem/physiol Actions
La collagénase est activée à l′aide de quatre atome-grammes de calcium par mole d′enzyme. Elle est inhibée par l′acide éthylèneglycol-bis(bêta-aminoéthyléther)-N,N,N′,N′-tétraacétique, le bêta-mercaptoéthanol, le glutathion, l′acide thioglycolique et la 8-hydroxyquinoline.
La collagénase est activée à l′aide de quatre grammes d′atomes de calcium par mole d′enzyme. Elle est inhibée par l′acide éthylèneglycol-bis(β-aminoéthyléther)-N,N,N′,N′-tétraacétique, le β-mercaptoéthanol, le glutathion, l′acide thioglycolique et la 8-hydroxyquinoline. Les collagénases et la protéase neutre jouent un rôle important dans l′efficacité de la libération de cellules à partir d′un tissu. La collagénase reconnaît la séquence -R-Pro-8-X-Gly-Pro-R-, où X est la plupart du temps un acide aminé neutre.
Preparation Note
Les solutions sont habituellement préparées à une concentration de 1-2 mg/ml dans du tampon TESCA (TES 50 mM, chlorure de calcium 0,36 mM, pH 7,4 à 37 °C).
Ce produit présente également des activités clostripaïne, protéase neutre non spécifique et triptyque.
Ce produit présente également des activités clostripaïne, protéase neutre non spécifique et triptyque.
Other Notes
Une unité de digestion de collagène (UDC) libère une quantité de peptides à partir du collagène d′un tendon d′Achille de bovin équivalant, en termes de couleur avec la méthode à la ninhydrine, à 1,0 μmole de leucine en 5 heures à pH 7,4 et à 37 °C en présence d′ions calcium. Une unité d′hydrolyse de FALGPA hydrolyse 1,0 μmole de furylacryloyl-Leu-Gly-Pro-Ala par minute à 25 °C. Une unité de protéase neutre hydrolyse la caséine et produit une couleur équivalente à 1,0 μmole de tyrosine en 5 heures à pH 7,5 et à 37 °C. Une unité de clostripaïne hydrolyse 1,0 μmole de BAEE par minute à pH 7,6 et à 25 °C en présence de DTT.
Disclaimer
Tel qu′il est livré, le produit est stable un an à -20 °C. Aucune perte de l′activité FALGPA ou protéase n′est observée au bout de 30 jours à 37 °C, 50 °C et -20 °C. Les solutions de collagénase brute sont stables lorsqu′elles sont congelées rapidement en aliquotes (à 10 mg/ml) et conservées à -20 °C. Tout cycle de congélation/décongélation supplémentaire détériore la solution. Le produit conserve 100 % de son activité pendant 7 heures lorsqu′il est placé sur de la glace.
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Réf. du produit
Description
Tarif
signalword
Danger
hcodes
Hazard Classifications
Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
target_organs
Respiratory system
Classe de stockage
11 - Combustible Solids
wgk
WGK 1
flash_point_f
Not applicable
flash_point_c
Not applicable
ppe
dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves
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Enzymes, 1 (1991)
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Methods in Enzymology, 192, 829-829 (1990)
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Instructions
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In case I want to make a stock solution of Collagenase type II of C. histolyticum to store at -20°C, can this be made in PBS or should this PBS already be supplemented with CaCl2? This is not specified in the product information sheet. Thank you.
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