BGALS-RO

β-Glucuronidase

from E. coli K 12

• Numéro CE : 3.2.1.31 (BRENDA, IUBMB)
• NACRES: NA.28
• UNSPSC Code: 12352204
• Biological source: Escherichia coli K12

Propriétés

• biological source: Escherichia coli K12
• form: solution
• mol wt: M_r ~220 kDa
• packaging: pkg of 1 mL (03707580001), pkg of 15 mL (03707601001), pkg of 5 mL (03707598001)
• manufacturer/tradename: Roche
• storage condition: (Keep container tightly closed in a dry and well-ventilated place.)
• parameter: 48 °C optimum reaction temp.
• technique(s): activity assay: suitable
• color: colorless
• optimum pH: 6.0-6.5
• solubility: water: soluble
• suitability: suitable for enzyme test
• UniProt accession no.: , P05804
• application(s): detection; sample preparation
• storage temp.: 2-8°C
• Gene Information: Escherichia coli ... uidA(946149)

Description

General description

Glucuronidase à 25 °C, ou 140 U/mg à 37 °C, à un pH de 7, avec du 4-nitrophényl-β-D-glucuronide comme substrat ; 1 ml de β-glucuronidase contient au moins 140 U à 37 °C.

Application

Les β-glucuronidases sont largement employées par les laboratoires de recherche et d'analyse pour l'hydrolyse enzymatique des β-glucuronides de stéroïdes. La β-glucuronidase est utilisée :

• pour l'hydrolyse des conjugués de stéroïdes (glucuronides) dans l'urine (pH 6,0–6,5).
• dans les contrôles anti-dopage.
• pour la détection de benzodiazépines à faibles doses.
• pendant la préparation des échantillons pour cliver les glucuronides avant analyse par GC-MS, HPLC, immuno-essai ou toute autre méthode analytique.

Elle a été utilisée pour hydrolyser l'entérolactone plasmatique et les glucuronides de testostérone et d'épitestostérone.

Biochem/physiol Actions

La glucuronoconjugaison est l'un des mécanismes fondamentaux du métabolisme. Nombre des substances présentées au corps humain subissent une transformation métabolique qui comprend une conjugaison avec l'acide glucuronique par des UDP-glucuronosyltransférases (UGT). βLa β-glucuronidase, également appelée β-D-glucuronoside glucuronosohydrolase, catalyse le transfert d'un résidu glucuronyle sur de nombreuses molécules biologiques ou pharmacologiquement actives endogènes et exogènes. Le glucuronide est en général plus soluble, moins toxique et plus facilement excrété par le corps humain que la molécule d'origine. Pour pouvoir analyser les conjugués de produits dopants présents dans les fluides corporels, comme l'urine et le plasma, il est nécessaire de déconjuguer le glucuronide. Il est très important de réaliser une hydrolyse enzymatique avant la détection pour obtenir une grande sensibilité lors du dépistage. L'échantillon hydrolysé peut être analysé par spectroscopie de masse, chromatographie en phase gazeuse, HPLC, dosage immunologique ou toute autre méthode d'analyse.

Clive l'acide glucuronique terminal qui est lié en β à un phénol ou à des monosaccharides, oligosaccharides ou polysaccharides.

Features and Benefits

βLa β-glucuronidase d'E. coli est une enzyme extrêmement spécifique des β-glucuronides. Elle est capable d'hydrolyser très rapidement les stéroïdes-β-glucuronides et de cliver de nombreux autres types de glucuronides, comme les benzodiazépines, les opioïdes et les cannabinoïdes. βLa β-glucuronidase est utilisée pour l'hydrolyse enzymatique des glucuronides dans les fluides biologiques, principalement l'urine. Les substances dopantes sont conjuguées à des glucuronides ; un bon dépistage de ces substances repose donc très souvent sur le clivage enzymatique, par la β-glucuronidase, des molécules de produit dopant glucuronoconjuguées.

• Réalisez des analyses rapides grâce à la forte activité spécifique de cette enzyme.
• Dépistez rapidement les stéroïdes, les benzodiazépines, les cannabinoïdes et les opioïdes.
• Gagnez du temps dans votre procédé en évitant d'avoir à laver le mélange réactionnel ou à tamponner l'urine.

Physical form

Solution dans du glycérol à 50 %, pH d'environ 6,5
(15 ml conditionné en un flacon)

Other Notes

L'unité internationale de l'activité β-glucuronidase correspond à l'activité enzymatique qui permet d'augmenter de 1 μM la vitesse de libération de 4-nitrophénol à partir de 4-nitrophényl-β-D-glucuronide (4NPG) à une température de +25 °C et un pH de 7,0.
L'unité Fishman était employée auparavant. Cette unité correspond à la libération de phénolphtaléine à partir de son glucuronide (PPG). Il n'est pas possible de mesurer les activités relatives de différentes préparations de β-glucuronides de stéroïdes en comparant leurs activités à celle du PPG. De nombreuses préparations ne catalysent pas de manière équivalente l'hydrolyse du PPG, du 4NPG ou des divers β-glucuronides de stéroïdes dans l'urine. Le choix du 4NPG comme substrat standard repose sur les considérations suivantes :

• La constante de Michaelis est similaire pour les deux substrats (K_M = 2 × 10^-4 M pour le 4NPG et K_M = 6 × 10^-5 M pour le PPG), mais les vitesses d'hydrolyse correspondantes diffèrent :
• Le 4NPG est hydrolysé à peu près 4 fois plus vite que le PPG.
• Le substrat en excès provoque une inhibition avec le PPG, alors que ce phénomène n'est pas observé avec le 4NPG.

La β-glucuronidase d'E. coli est une enzyme qui ne présente quasiment aucune activité sulfatase et qui se révèle particulièrement efficace pour cliver les conjugués de stéroïdes et de benzodiazépines.
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Informations sur la sécurité

• Classe de stockage: 12 - Non Combustible Liquids
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