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HPLC-Puffer

Anhäufung von Puffersalzkristallen

Puffer sind Lösungen einer schwachen Säure und ihrer konjugierten Base oder einer schwachen Base und ihrer konjugierten Säure. In der analytischen Chemie werden Puffer üblicherweise in der Umkehrphasen-Hochleistungsflüssigchromatographie (RP-HPLC) verwendet, wenn die Probe saure oder basische funktionelle Gruppen enthält. Puffer mildern den Einfluss von Wasserstoff-/Hydronium- und Hydroxidionen und reduzieren so pH-Schwankungen.   

Weitere Informationsquellen

  • Brochure: LC-MS Resource Guide

    A Comprehensive Portfolio for Consistent Results in Routine and Advanced LC-MS applications

  • HPLC Method Transfer Calculator

    Easily transfer a method between HPLC columns, (scale between microbore through preparative range), based on the 2 column dimensions and current method conditions.

Mobile Phase Puffer

Die richtige Wahl des Puffers ist im Hinblick auf Pufferspezies, Ionenstärke und pH-Wert der wichtigste Schritt bei der RP-HPLC-Methodenentwicklung für ionische Analyten. Die Retention von ionischen Analyten wird in der RP-HPLC grundlegend durch den pH-Wert der mobilen Phase beeinflusst. Daher ist die Kontrolle des pH-Werts der mobilen Phase in der RP-HPLC einer der wichtigsten Parameter für eine effektive Analytentrennung.

Der typische pH-Bereich für Umkehrphasentrennungen in Säulen auf Kieselgelbasis liegt zwischen 2 und 8. Der Puffer muss einen pKa nahe dem gewünschten pH-Wert haben, da der pH-Wert von Puffern am besten an ihrem pKa-Wert kontrolliert werden kann. Als Faustregel gilt, dass es ideal ist, einen Puffer mit einem pKa-Wert < 2 Einheiten des gewünschten pH-Wertes der mobilen Phase zu wählen. Wir bieten Puffer in HPLC-Qualität für einen breiten pH-Bereich – für all Ihre chromatographischen Anforderungen im Labor.

Faktoren, die bei der Auswahl eines HPLC-Puffers zu berücksichtigen sind

Chemische Reinheit

Die Qualität der in einem HPLC-Experiment verwendeten Additive der mobilen Phase (Puffer, Salze, Säuren und Basen) sowie der organischen Lösungsmittel muss an die Empfindlichkeit des Detektors und das Elutionsprotokoll angepasst werden. Für eine optimale Chromatographie werden qualitativ hochwertige Lösungsmittel und Reagenzien empfohlen.

Chemische Kompatibilität

Die Pufferzusammensetzung muss zusammen mit dem pH-Wert der mobilen Phase passend zum Material des Säulengehäuses und der Art der stationären Phase gewählt werden. Dies verhindert Schäden an den Komponenten der Säule und am Säulenbett.

Pufferlöslichkeit

Im Idealfall soll der Puffer vollständig wasserlöslich sein und nicht präzipitieren. Die Pufferkonzentration muss sorgfältig gewählt werden, um eine Präzipitation bei höheren Konzentrationen zu vermeiden, wenn der Puffer mit dem organischen Lösungsmittel gemischt wird. Wenn dies nicht berücksichtigt wird, kann es zu Betriebsproblemen in den Pumpen kommen und in einer Verstopfung der HPLC-Säule resultieren.

Pufferstärke

Ein Eluent, der eine schwache Wechselwirkung mit der stationären Phase zeigt, ist nur in der Lage, schwach gebundene Analyten von der Säule zu eluieren, wohingegen eine starke Wechselwirkung die Elution stark gebundener Probenmoleküle bewirkt. Die Elutions- oder Lösungsmittelstärke verschiedener Lösungsmittel hängt von der Art der verwendeten stationären Phase ab. Neben der Elutionsstärke spielen die Viskosität und die UV-Absorbanz des Puffers eine wichtige Rolle im Hinblick auf ihre Eignung für den Einsatz in HPLC-Analysen. 

Zugehörige Produktkategorien
HPLC-Säulen
Erreichen Sie präzise Trennvorgänge mit unserem umfassenden Angebot an HPLC-Säulen. Verbessern Sie Retention, Auflösung und Selektivität. Bestellen Sie noch heute!
Fläschchen für die Analyse
Für präzise Analysen: Inerte, zertifizierte Fläschchen verhindern das Extrahieren und Herauslösen von Substanzen. Reduzieren Sie das Risiko mit den Supelco®-Autosampler- und Allzweckfläschchen für HPLC, GC/MS, LC/MS.
Analytische Reagenzien
Analytische Reagenzien und Lösungsmittel für die Nasschemie, Chromatographie, Spektroskopie, Titration, Mikrobiologie, Mikroskopie, Gravimetrie, Wasseranalyse und Ionensensoren.
Lösungsmittel
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Salze
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Säuren
Entdecken Sie eine umfassende Palette an Säuren, die in drei Portfolios für eine Vielzahl von Anwendungen angeboten werden: Supelco® Produkte für die analytische Chemie, Sigma-Aldrich® Materialien für Labor und Produktion, SAFC® Produkte für die biopharmazeutische und pharmazeutische Entwicklung und Herstellung.
Ätzalkalien & Basen
Mit unseren drei Portfoliomarken bieten wir Ihnen Ätzalkalien und Basen, die die verschiedenen Anforderungen Ihrer spezifischen Anwendungen erfüllen. Produkte der Marke Supelco® für die analytische Chemie, Materialien der Marke Sigma-Aldrich® für Labor und Produktion sowie Produkte der Marke SAFC® für die biopharmazeutische und pharmazeutische Entwicklung und Herstellung.
Zugehörige Anwendungen
HPLC niedermolekularer Verbindungen
Niedermolekulare Verbindungen, sogannte Small Molecules, sind neutrale und ionische Verbindungen mit einem Molekulargewicht, das üblicherweise unterhalb von 900 Dalton liegt. Diese Verbindungen können durch HPLC, UHPLC und LC-MS vornehmlich unter Verwendung von Kieselgelpartikeln oder monolithischen stationären Phasen mit einem breiten Spektrum von „Säulenchemien“ (Modifikationen) effektiv getrennt und analysiert werden.
HPLC großer Moleküle
Die Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (HPLC) kann zur Trennung und Identifizierung verschiedener großer Biomoleküle wie Proteine und Peptide in einer Probe verwendet werden. Sie basiert auf dem Durchpressen einer Probe mit einem Lösungsmittel (mobile Phase) bei hohem Druck durch eine mit Sorbent (stationäre Phase) gepackte Säule.
Nasschemische Analyse
Bei der nasschemischen Analyse werden die gewünschten Elemente, die in einer Flüssigprobe vorhanden sind, mit verschiedenen Messverfahren identifiziert und quantifiziert. Bei chemischen Reagenzien setzt der Analyt anteilig einen Farbstoff um, der visuell oder photometrisch bestimmt werden kann.
Massenspektrometrie
Die Massenspektrometrie (MS) ist eine Analysentechnik zur Identifizierung von Verbindungen, Bestimmung der chemischen Struktur und Bewertung der Isotopenhäufigkeit. In der MS werden die Proben ionisiert und die resultierenden Ionen werden auf der Grundlage ihres Masse-zu-Ladungs-Verhältnisses (m/z) identifiziert.
Probenvorbereitung durch Filtration
In der Filtration werden Stoffe aufgrund ihrer physikalischen oder chemischen Eigenschaften getrennt. Laborproben werden vor der Analyse routinemäßig gefiltert, um die Komplexität der Proben zu reduzieren und die Reinheit des Analyten zu erhöhen. Dadurch wird es Wissenschaftlern möglich, qualitativ hochwertige analytische Ergebnisse zu erzielen.
Probenaufreinigung
Zur Vorbereitung einer Probe vor der nachgeschalteten Analyse können verschiedene Aufreinigungsmethoden verwendet werden. Durch die Aufreinigung wird die Komplexität der Probe reduziert, Interferenzen werden entfernt und Analyten vor der Analyse aufkonzentriert.
QuEChERS Probenvorbereitungsmethode
QuEChERS ist eine schnelle, einfache, kostengünstige, effektive, robuste und sichere Probenaufreinigungsmethode, die zur Vorbereitung von Lebensmittel- und landwirtschaftlichen Proben für die Pestizidanalyse verwendet wird. QuEChERS basiert auf der Technik der Festphasenextraktion (SPE) zur Probenvorbereitung.
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