TRANSRTRO

Transcriptor Reverse Transcriptase

• UNSPSC-Code: 41106313
• NACRES: NA.21

Eigenschaften

• Rekombinant: expressed in E. coli
• Qualitätsniveau: 100
• Assay: ≥90% (SDS-PAGE)
• Form: liquid
• Verwendung: sufficient for 25 reactions; sufficient for 50 reactions; sufficient for 500 reactions
• Spezifische Aktivität: 0.05 U/mg
• Leistungsmerkmale: dNTPs included: no; hotstart: no
• Hersteller/Markenname: Roche
• Verpackung: pkg of 200 reactions (03531287001); pkg of 25 reactions (03531317001); pkg of 50 reactions (03531295001)
• Methode(n): RT-PCR: suitable; RT-qPCR: suitable
• Farbe: colorless
• pH-Wert: 7.2
• Löslichkeit: water: miscible
• Eignung: suitable for molecular biology
• UniProt-Hinterlegungsnummer: Q9JG39
• Anwendung(en): genomic analysis; life science and biopharma
• Nachweisverfahren: probe-based
• Fremdaktivität: DNase activity, none detected; Nicking activity, none detected; RNase activity, none detected
• Lagertemp.: −20°C (−15°C to −25°C)

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

Eine rekombinante reverse Transkriptase zur robusten Transkription von RNA-Fragmenten bis zu 14 kb unter Verwendung einer zweistufigen RT-PCR mit Thermocyclern und Echtzeit-PCR-Instrumenten.

In Retroviren wie dem humanen Immundefizienz-Virus Typ 1 (HIV-1) ist die reverse Transkriptase (RT) das Kernenzym. HIV-1 RT besteht aus zwei Untereinheiten von 66 kDa und 51 kDa (p66 und p51). Ein humaner endogener Retrovirus der HERV-K-Familie kodiert für das Enzym der reversen Transkriptase (RT-Enzym).

Anwendung

Die Transkriptor Reverse Transkriptase ist für die Transkription von RNA (mRNA, Gesamt-RNA, viraler RNA und in-vitro-transkribierter RNA) aus einer Vielzahl von Quellen unter Verwendung herkömmlicher Thermocycler und Real-Time-PCR-Instrumente (z. B. der LightCycler^® Instrumente) für die folgenden Anwendungen konzipiert:

• Synthese von Erststrang-cDNA zur Verwendung in nachfolgenden Amplifikationsreaktionen
• RT-PCR von GC-reichen RNA-Templates
• Cy3-, Cy5-, DIG-, Biotin- und Aminoallyl-Markierung während der cDNA-Synthese
• Auffindung und Klonierung von 5′- und 3′-Ende der mRNA durch RACE
• Erstellung von cDNA-Bibliotheken mit großen Einfügungen
• Dideoxy-DNA-Sequenzierung
• RNA-Sequenzierung
• Markierung am 3′-Ende von DNA-Fragmenten
• Erstellung von Einzelstrangsonden für genomische Spuren
• Bei der reversen Transkription von RNA aus humanem Papillomavirus E6, kortikalem und striatalem Gewebe, Muskelbiopsien von Becker-Muskeldystrophie-Proben und miRNA-Stammzellen aus Eizellen und humanen zerebralen mikrovaskulären Endothelzellen (hCMVECs)

Biochem./physiol. Wirkung

Die humane Immundefizienz-Virus Typ 1 reverse Transkriptase (HIV-1 RT) ist grundlegend für die katalytische Umwandlung der einzelsträngigen viralen RNA in die doppelsträngige lineare DNA, die in den Wirtszellchromosomen integriert ist.

Leistungsmerkmale und Vorteile

• Hohe Empfindlichkeit in zweistufiger RT-PCR.

Transcriptor Reverse Transcriptase wird in konventionellen Thermocyclern und Echtzeit-PCR-Instrumenten (z. B. in LightCycler^®-Instrumenten) verwendet.

• Häufigere vollständige („full-length“) Transkriptionen mit bis zu 14 kb.

Es können cDNA-Bibliotheken mit großen Einfügungen erstellt werden.

• Schwierige Templates revers transkribieren.

Das Enzym funktioniert gut bei höheren Temperaturen, wodurch die RNA-Sekundärstruktur überwunden wird (z. B. GC-reiche RNA-Templates) und optimale Reaktionsbedingungen ermöglicht werden.

• cDNA wirksam markieren.

Cy3-, Cy5-, DIG-, Biotin- oder Aminoallyl-markierte Nukleotide werden bei der cDNA-Synthese eingebaut.

Komponenten

• Transcriptor Reverse Transcriptase, in Lagerpuffer
• Transcriptor-RT-Puffer, 5x konzentriert

Qualität

Jede Charge der Transcriptor Reverse Transcriptase wird in der RT-PCR routinemäßig auf ihre Funktion getestet:

• mit einem konventionellen Thermocycler zur Detektion eines 10 kb-Fragments des menschlichen Dystrophin-Gens, ausgehend von der Gesamt-RNA des menschlichen Skelettmuskels
• mit dem LightCycler^®-Instrument zur Detektion von 5 x 10² bis 5 x 10⁶ Kopien von in-vitro-transkribierter menschlicher PBGD RNA. Die Ergebnisse werden in festen Kreuzungspunkten und fester Fluoreszenzintensität festgelegt.

Angaben zur Herstellung

Volumenaktivität: 20 U/μl
Transkription langer, seltener oder schwieriger RNA-Ziele
Transcriptor Reverse Transcriptase wird für die RT-PCR folgender Ziele empfohlen:

• lange Ziele, da sie bis zu 14 kb RNA-Templates transkribieren kann
• seltene Ziele, da sie eine hohe Empfindlichkeit besitzt
• GC-reiche Ziele, da sie bei hohen Temperaturen (bis zu +65^oC) funktioniert, um Probleme aufgrund einer extensiven Sekundärstruktur zu beseitigen

Markierung für viele Anwendungen
Transcriptor Reverse Transcriptase wird auch für die Herstellung markierter cDNA empfohlen, da sie eine Vielzahl modifizierter Nukleotide (einschließlich Cy3-, Cy5-, DIG-, Biotin- oder Aminoallyl-markierter dNTPs) übernimmt.
Reaktionsanforderungen
Transcriptor übernimmt ssRNA- und ssDNA-Templates und benötigt einen Primer zur Transkription.

Lagerung und Haltbarkeit

Wiederholtes Einfrieren und Auftauen ist zu vermeiden.

Sonstige Hinweise

Nur für die Life-Science-Forschung. Nicht zur Verwendung in diagnostischen Verfahren vorgesehen.

Rechtliche Hinweise

LightCycler is a registered trademark of Roche

Sicherheitshinweise

• Lagerklassenschlüssel: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: WGK 1
• Flammpunkt (°F): does not flash
• Flammpunkt (°C): does not flash