Western Blotting

Beim Immunnachweis mittels Western Blotting werden Proteine durch ihre Bindung an spezifische Antikörper identifiziert. In der Regel wird ein Primärantikörper in Kombination mit einem HRP- oder AP-konjugierten Sekundärantikörper für den chemilumineszenten oder kolorimetrischen Nachweis unter Einsatz eines geeigneten Substrats verwendet. Alternativ kann ein fluoreszenzmarkierter Primär- oder Sekundärantikörper zur direkten Visualisierung verwendet werden.

Western Blotting wird in der Biochemie häufig eingesetzt, um das Vorhandensein spezifischer Proteine nachzuweisen, das Ausmaß posttranslationaler Modifikationen zu bestimmen, die Proteinexpression bei Klonierungsanwendungen zu verifizieren und die Expressionsniveaus von Proteinen und Biomarkern zu analysieren. Darüber hinaus in der Antikörper-Epitopkartierung und in der Klinik für Biomarkertests.

Die Notwendigkeit, mehr Proteine in begrenzten Proben gleichzeitig zu analysieren, hat die Forschung zur Verbesserung der Empfindlichkeit und Geschwindigkeit von Blotting-Techniken vorangetrieben. Durch das Doppelblotting werden falsch-positive Ergebnisse aufgrund unspezifischer Wechselwirkungen vermieden. Far-Western Blotting ermöglicht den Nachweis spezifischer Protein-Protein-Interaktionen. Das South-Western Blotting dient der Identifizierung von Proteinen, die mit bestimmten DNA-Sequenzen interagieren. Durch Multistrip-Blotting wird der Durchsatz erhöht und gleichzeitig die Inter-Blot-Variabilität minimiert. Es werden neue Technologien entwickelt, um die zur Erzeugung eines Signals erforderlichen Proteinmengen zu verringern und die quantitativen Möglichkeiten des Western Blotting zu verbessern.