General description
La ácido glutámico descarboxilasa (GAD; E.C. 4,1.1,15) es la enzima responsable de la conversión del ácido glutámico en ácido gamma-aminobutírico (GABA), el principal transmisor inhibidor en las regiones cerebrales superiores, y la supuesta hormona paracrina en los islotes pancreáticos. Las dos formas moleculares de la GAD (65 kDa y 67 kDa, identidad de a.a. entre formas del 64 %) están muy conservadas y las dos se expresan en el SNC, las células de los islotes pancreáticos, los testículos, el oviducto y los ovarios. Las isoformas están distribuidas regionalmente en el citoplasma de los cerebros de ratas y ratones (Sheikh, 1999). La GAD65 es una proteína anfifila, anclada a la membrana (585 a.a.), codificada en el cromosoma humano 10, y es responsable de la producción vesicular de GABA. La GAD67 es citoplásmica (594 a.a.), codificada en el cromosoma 2, y parece ser responsable de la producción citoplásmica significativa de GABA. La expresión de la GAD cambia durante el desarrollo neuronal en la médula espinal de rata. La GAD65 se expresa transitoriamente en los axones comisurales alrededor de E13 pero se regula a la baja al día siguiente, mientras que la expresión de GAD67 aumenta principalmente en los cuerpos de esas neuronas (Phelps, 1999). En el páncreas maduro de rata, la GAD65 y la GAD67 parecen estar diferencialmente localizados, la GAD65 principalmente en las células beta que contienen insulina y la GAD67 en las células (A) que contienen glucagón (A) (Li, 1995). La expresión de la GAD67 parece ser particularmente plástica y puede cambiar en respuesta a la manipulación experimental (por ejemplo, estimulación neuronal o transección) o a la progresión de la enfermedad y a trastornos emergentes como la esquizofrenia (Volk, 2000). La co-localización de las dos isoformas de la GAD muestra también cambios en las distribuciones de GAD65/GAD67 relacionadas con ciertos estados patológicos como la IDDM y el SMS.
Specificity
El anticuerpo anti-GAD67, clon 1G10.2, reacciona con la isoforma de 67 kDa de la glutamato descarboxilasa (GAD67) de rata, ratón y humanos; otras especies aún no estudiadas. Sin reactividad cruzada detectada con la GAD65 mediante inmunotransferencia Western en lisado cerebral de rata en comparación con AB1511, que reacciona con la GAD65 y la GAD67.
Immunogen
Proteína GAD67 recombinante
Application
Categoría de investigación
Neurociencia
Este anticuerpo anti-GAD67, clon 1G10.2, está validado para utilizar en IH, IH(P) y WB para la detección de la GAD67. Este anticuerpo anti GAD se ha citado más de 75 veces.
Inmunotransferencia Western: Se utilizó una dilución 1:5.000-1:10.000 en un lote anterior empleando ECL en lisado cerebral de rata y ratón.
Inmunohistoquímica en tejido de ratón y rata fijado con paraformaldehído al 4 %: 1:1 000-1:5 000. El anticuerpo ha funcionado también bien en tejido humano fijado durante 10 minutos en PFA al 4 % a 4°C o en etanol al 100 % a +20°C o acetona al 100 % a -20°C en diluciones 1:2 500-1:5 000.
También existe un anticuerpo policlonal anti GAD67, como AB5992.
El usuario debe determinar las diluciones de trabajo óptimas.
Subcategoría de investigación
Neurotransmisores y receptores
Marcadores neuronales y de la glía
Quality
Evaluada sistemáticamente mediante inmunohistoquímica de lisado de células SKNSH.
Análisis inmunohistoquímico (parafina):
Patrón de tinción representativo y morfología de GAD67 en la corteza somatosensorial 1, en los campo de barriles de la corteza cerebral de ratón. Todas las manchas marrones son neuronas con lámina VI A. No fue necesaria la recuperación del epítopo. Este lote del anticuerpo se diluyó a 1:500, utilizando IHC Select Detection con HRP-DAB.
Patrón de tinción/morfología óptimos de GAD67: Cerebro de ratón.
Linkage
Sustituye a: AB5992; AB5862P
Physical form
IgG2a monoclonal de ratón purificada en disolución tampón que contiene azida sódica al 0,1 %
Presentación: Purificada
Proteína A purificada
Storage and Stability
Estable durante 6 meses entre 2 y 8ºC en alícuotas no diluidas desde la fecha de recepción.
Analysis Note
Control
Lisado de células SKNSH (neuroblastoma humano), corteza cerebral de ratón.
Legal Information
CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
Disclaimer
Salvo que se indique lo contrario en nuestro catálogo o en otra documentación de la empresa que acompañe al producto, nuestros productos están indicados sólo para investigación y no deben utilizarse para ningún otro propósito, como, entre otros, usos comerciales no autorizados, diagnóstico in vitro, usos terapéuticos ex vivo o in vivo o cualquier tipo de consumo o aplicación en humanos o animales.
