Centre de référence sur les tampons

• Table des domaines tampons d'une sélection de tampons biologiques (25 °C, 0,1 M)
• Préparation de tampons Tris ou Trizma^® (pH en fonction de la température)
• Préparation de tampons phosphate (solution 0,2 M)
• Préparation de tampons acide citrique/Na₂HPO₄ (pH 2,6 à 7,6)
• Préparation de tampons acide citrique/citrate de sodium (pH 3,0 à 6,2)
• Préparation de tampons acétate de sodium/acide acétique (pH 3,7 à 5,6)
• Préparation de tampons Na₂HPO₄/NaH₂PO₄ (pH 5,8 à 8,0 à 25 °C)
• Préparation de tampons imidazole (glyoxaline)/HCl (pH 6,2 à 7,8 à 25 °C)
• Préparation de tampons carbonate de sodium/bicarbonate de sodium (pH 9,2 à 10,8)
• Formules et équations utiles

Choisir le bon tampon biologique

Choisissez votre tampon en fonction de vos besoins en pH ainsi que du pKa, mesure de la force de l'acide qui détermine le pH, de la concentration et de la température. Tenez également compte des exigences règlementaires ou des exigences de pureté propres à votre application. Les tables suivantes vous guideront dans la préparation de nombreuses solutions tampons courantes, selon le pH et le pKa.

En plus de ces tables, nous avons mis au point plusieurs calculateurs de recettes pour les tampons afin de vous faciliter la tâche.

Les tampons TBE et TAE pour l'électrophorèse sur gel ont des recettes un peu plus complexes. Nous pouvons vous aider à choisir la bonne.

Qu'est-ce que la qualité d'un tampon ?

Il s'agit du niveau de qualité et du taux d'impuretés adaptés à une utilisation donnée. Nous proposons six qualités de tampons indiquées pour un usage classique en laboratoire, la formulation et la fabrication de produits pharmaceutiques finaux, et diverses applications intermédiaires pouvant nécessiter la recherche de traces de métaux ou des matières d'une certaine pureté.

Table des domaines tampons d'une sélection de tampons biologiques (25 °C, 0,1 M)
Tampon	Domaine tampon utile	pKa (à 20 °C)	pKa (à 25 °C)	pKa (à 37 °C)	Qualité "réactif"	Qualité certifiée "bioperformance"
MES	5,5–6,7	6,16	6,10	5,97	M8250	M2933
Bis-Tris	5,8–7,2	–	6,50	6,36	B9754	B4429
ADA	6,0–7,2	6,65	6,59	6,46	A9883	–
ACES	6,1–7,5	6,88	6,78	6,54	A9758	A3594
PIPES	6,1–7,5	6,80	6,76	6,66	P6757	P1851
MOPSO	6,2–7,6	–	6,90	6,75	M8389	–
Bis-Tris propane	6,3–9,5	–	6,8, 9,0	–	B6755	B4679
BES	6,4–7,8	7,17	7,09	6,90	B9879	B4554
MOPS	6,5–7,9	7,28	7,20	7,02	M1254	M3183
TES	6,8–8,2	7,50	7,40	7,16	T1375	T5691
HEPES	6,8–8,2	7,55	7,48	7,31	H3375	H4034
DIPSO	7,0–8,2	–	7,60	7,35	–	–
MOBS	6,9–8,3	–	7,60	–	M3295	–
TAPSO	7,0–8,2	–	7,60	7,39	T9269	–
Tris ou Trizma®	7,0–9,0	8,20	8,06	7,72	T1503	T6066
HEPPSO	7,1–8,5	–	7,80	6,66	–	–
POPSO	7,2–8,5	–	7,80	7,63	P3405	–
TEA	7,3–8,3	–	7,80	–	–	–
EPPS	7,3–8,7	–	8,00	–	E9502	E0276
Tricine	7,4–8,8	8,16	8,05	7,80	T0377	T5816
Gly-Gly	7,5–8,9	–	8,20	–	G1002	G3915
Bicine	7,6–9,0	8,35	8,26	8,04	B3876	–
HEPBS	7,6–9,0	–	8,30	–	H6903	–
TAPS	7,7–9,1	8,49	8,40	8,18	T5130	T5316
AMPD	7,8–9,7	–	8,80	–	A9754	–
TABS	8,2–9,6	–	8,90	–	–	–
AMPSO	8,3–9,7	–	9,00	9,10	A6659	–
CHES	8,6–10,0	9,55	9,49	9,36	C2885	–
CAPSO	8,9–10,3	–	9,60	9,43	C2278	–
AMP	9,0–10,5	–	9,70	–	–	–
CAPS	9,7–11,1	10,56	10,40	10,02	C2632	–
CABS	10,0–11,4	–	10,70	–	C5580	–

Table de préparation de tampons Tris ou Trizma^® (pH en fonction de la température)

pH à
5 °C	25 °C	37 °C
7,76	7,20	6,91
7,89	7,30	7,02
7,97	7,40	7,12
8,07	7,50	7,22
8,18	7,60	7,30
8,26	7,70	7,40
8,37	7,80	7,52
8,48	7,90	7,62
8,58	8,00	7,71
8,68	8,10	7,80
8,78	8,20	7,91
8,88	8,30	8,01
8,98	8,40	8,10
9,09	8,50	8,22
9,18	8,60	8,31
9,28	8,70	8,42
9,36	8,80	8,51
9,47	8,90	8,62
9,56	9,00	8,70

g/l pour une solution 0,05 M
Trizma® HCl	Trizma® Base
7,02	0,67
6,85	0,80
6,61	0,97
6,35	1,18
6,06	1,39
5,72	1,66
5,32	1,97
4,88	2,30
4,44	2,65
4,02	2,97
3,54	3,34
3,07	3,70
2,64	4,03
2,21	4,36
1,83	4,65
1,50	4,90
1,23	5,13
0,96	5,32
0,76	5,47

Table de préparation de tampons phosphate (solution 0,2 M)

Phosphate de potassium monobasique anhydre (g/l)	Phosphate de sodium dibasique heptahydraté (g/l)	pH à 23 °C
22,4	3,49	5,7
22,08	4,29	5,8
21,60	5,37	5,9
21,05	6,60	6,0
20,40	8,05	6,1
19,56	9,93	6,2
18,60	12,07	6,3
17,64	14,22	6,4
16,44	16,90	6,5
15,00	20,12	6,6
13,56	23,34	6,7
12,24	26,29	6,8

Phosphate de potassium monobasique anhydre (g/l)	Phosphate de sodium dibasique heptahydraté (g/l)	pH à 23 °C
10,80	29,51	6,9
9,36	32,73	7,0
7,92	35,95	7,1
6,72	38,63	7,2
5,52	41,31	7,3
4,56	43,46	7,4
3,84	45,07	7,5
3,12	46,68	7,6
2,52	48,55	7,7
2,04	49,09	7,8
1,68	49,89	7,9
1,27	50,81	8,0

Préparation de tampons acide citrique/Na₂HPO₄ (pH 2,6 à 7,6)¹

L'acide citrique monohydraté (C₆H₈O₇ • H₂O, PM 210,14) 0,1 M contient 21,01 g/l. Na₂HPO₄ (PM 141,98) 0,2 M contient 28,40 g/l, ou Na₂HPO₄ • 2H₂O (PM 178,05) 0,2 M contient 35,61 g/l.

x ml d'acide citrique 0,1 M et y ml de Na₂HPO₄ 0,2 M mélangés

pH	x ml d'acide citrique 0,1 M	y ml de Na2HPO4 0,2 M
2,6	89,10	10,90
2,8	84,15	15,85
3,0	79,45	20,55
3,2	75,30	24,70
3,4	71,50	28,50
3,6	67,80	32,20
3,8	64,50	35,50
4,0	61,45	38,55
4,2	58,60	41,40
4,4	55,90	44,10
4,6	53,25	46,75
4,8	50,70	49,30
5,0	48,50	51,50
5,2	46,40	53,60
5,4	44,25	55,75
5,6	42,00	58,00
5,8	39,55	60,45
6,0	36,85	63,15
6,2	33,90	66,10
6,4	30,75	69,25
6,6	27,25	72,75
6,8	22,75	77,25
7,0	17,65	82,35
7,2	13,05	86,95
7,4	9,15	90,85
7,6	6,35	93,65

Préparation de tampons acide citrique/citrate de sodium (pH 3,0 à 6,2)¹

L'acide citrique monohydraté (C₆H₈O₇ • H₂O, PM 210,14) 0,1 M contient 21,01 g/l. Le citrate trisodique dihydraté (C₆H₅O₇Na₃ • 2H₂O, PM 294,12) 0,1 M contient 29,41 g/l.

x ml d'acide citrique 0,1 M et y ml de citrate trisodique 0,1 M mélangés

pH	x ml d'acide citrique 0,1 M	y ml de citrate trisodique 0,1 M
3,0	82,0	18,0
3,2	77,5	22,5
3,4	73,0	27,0
3,6	68,5	31,5
3,8	63,5	36,5
4,0	59,0	41,0
4,2	54,0	46,0
4,4	49,5	50,5
4,6	44,5	55,5
4,8	40,0	60,0
5,0	35,0	65,0
5,2	30,5	69,5
5,4	25,5	74,5
5,6	21,0	79,0
5,8	16,0	84,0
6,0	11,5	88,5
6,2	8,0	92,0

Préparation de tampons acétate de sodium/acide acétique (pH 3,7 à 5,6)¹

L'acétate de sodium trihydraté (CH₃COONa • 3H₂O, PM 136,09) 0,2 M contient 27,22 g/l.

x ml de NaOAc 0,2 M et y ml d'AcOH 0,2 M mélangés

pH à 18 °C	x ml de NaOAc 0,2 M	y ml d'AcOH 0,2 M
3,7	10,0	90,0
3,8	12,0	88,0
4,0	18,0	82,0
4,2	26,5	73,5
4,4	37,0	63,0
4,6	49,0	51,0
4,8	59,0	41,0
5,0	70,0	30,0
5,2	79,0	21,0
5,4	86,0	14,0
5,6	91,0	9,0

Préparation de tampons Na₂HPO₄/NaH₂PO₄ (pH 5,8 à 8,0 à 25 °C)¹

Na₂HPO₄ • 2H₂O (PM 178,05) 0,2 M contient 35,61 g/l. Na₂HPO₄ • 12H₂O (PM 358,22) 0,2 M contient 71,64 g/l. NaH₂PO₄ • H₂O (PM 138,01) 0,2 M contient 27,6 g/l. NaH₂PO₄ • 2H₂O (PM 156,03) 0,2 M contient 31,21 g/l.

x ml de Na₂HPO₄ 0,2 M, y ml de NaH₂PO₄ 0,2 M, dilués à 100 ml dans l'eau (H₂O)

pH à 25 °C	x ml de Na2HPO4 0,2 M	y ml de NaH2PO4 0,2 M
5,8	4,0	46,0
6,0	6,15	43,85
6,2	9,25	40,75
6,4	13,25	36,75
6,6	18,75	31,25
6,8	24,5	25,5
7,0	30,5	19,5
7,2	36,0	14,0
7,4	40,5	9,5
7,6	43,5	6,5
7,8	45,75	4,25
8,0	47,35	2,65

Préparation de tampons imidazole (glyoxaline)/HCl (pH 6,2 à 7,8 à 25 °C)¹

Imidazole, C₃H₄N₂, PM 68,08

25 ml d'imidazole 0,2 M (13,62 g/l), x ml de HCl 0,2 M, dilués à 100 ml dans l'eau (H₂O)

pH à 25 °C	x ml de HCl 0,2 M
6,2	21,45
6,4	19,9
6,6	17,75
6,8	15,2
7,0	12,15
7,2	9,3
7,4	6,8
7,6	4,65
7,8	3,0

Préparation de tampons carbonate de sodium/bicarbonate de sodium (pH 9,2 à 10,8)¹

Na₂CO₃ • 10H₂O (PM 286,2) 0,1 M contient 28,62 g/l. NaHCO₃ (PM 84,0) 0,1 M contient 8,40 g/l.

x ml de Na₂CO₃ 0,1 M et y ml de Na₂HCO₃ 0,1 M mélangés

20 °C	37 °C
x ml de Na2CO3 0,1 M	y ml de Na2HCO3 0,1 M
9,2	8,8	10	90
9,4	9,1	20	80
9,5	9,4	30	70
9,8	9,5	40	60
9,9	9,7	50	50
10,1	9,9	60	40
10,3	10,1	70	30
10,5	10,3	80	20
10,8	10,6	90	10

Formules et équations utiles

Pourcentage en poids (p/v)

(% de tampon souhaité / 100) × volume de tampon final (ml) = quantité de matière de départ nécessaire (g)

Solutions molaires

Molarité souhaitée × masse moléculaire × volume de solution final (l) = quantité nécessaire (g)

Équation d'Henderson-Hasselbach

Référence

1. Dawson R, Elliot D, Elliot W, Jones KM. 1986. Data for Biochemical Research. 3rd ed.. Oxford Science Publ..