T4455

Proteasa del TEV

• Sinónimos: P1 protease, TEVp, Tobacco Etch Virus protease, rTEV
• NACRES: NA.54
• UNSPSC Code: 12352204
• Specific activity: ≥3,000 units/mg protein
• Biological source: microbial (Tobacco Etch virus)
• Recombinant: expressed in E. coli

Propiedades

• biological source: microbial (Tobacco Etch virus)
• Quality Segment: 200
• recombinant: expressed in E. coli
• description: Contains both a histidine tag and a GST tag
• form: solution
• specific activity: ≥3,000 units/mg protein
• mol wt: 27 kDa
• technique(s): protein purification: suitable
• suitability: suitable for purification of HIS tagged recombinant proteins
• application(s): genomic analysis
• shipped in: wet ice
• storage temp.: −20°C

Descripción

General description

La proteasa del virus del grabado del tabaco (TEV) es una herramienta útil para la eliminación de las etiquetas de fusión de las proteínas recombinantes.

Construcción de proteasa TEV de 52 kDa modificada que contiene tanto GST como etiquetas de histidina para fácil eliminación utilizando medios de afinidad por glutatión o His-Select^®.

La proteasa TEV es un dominio catalítico genotecnológico de la proteasa NIa del virus del grabado del tabaco. La proteasa TEV es una proteasa de cisteína muy específica que pertenece a la familia de peptidasas C4.

La proteasa TEV tiene un dominio catalítico de actividad proteasa (NI) que corresponde a un peso molecular de 27 kDa. Es único con gran especificidad y es activo a baja temperatura.

Application

La proteasa TEV se ha utilizado en la eliminación de la etiqueta de histidina de la proteína cinasa 14 activada por mitógeno (MAPK14) recombinante, el fragmento C-terminal de la Connexin43 (Cx43) y la δ1-pirrolina-5-carboxilato reductasa de Oryza sativa. También se ha utilizado en la elución de proteosomas más purificados de las líneas celulares de leucemia humana K562.

Biochem/physiol Actions

La proteasa TEV inmovilizada en estreptavidina-agarosa es una herramienta eficiente para el desanclaje de la proteína de fusión. La proteasa TEV también se ha utilizado en un estudio para investigar el procesamiento proteolítico de nlrp1b para la actividad inflamasoma. [1]

La proteasa TEV tiene una secuencia estricta de reconocimiento de escisión de siete aminoácidos, la Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓Gly/Ser.

La proteasa del virus del grabado del tabaco (TEV) experimenta autólisis, pero hay mutantes de la proteasa del TEV resistentes a la autólisis. La expresión bacteriana de la proteasa TEV recombinante provoca mal rendimiento y menos solubilidad. El empleo de la fusión de la proteína fluorescente verde y la proteasa TEV permite superar estos inconvenientes y encuentra aplicación en la investigación genómica estructural.

Features and Benefits

Diseñado y purificado óptimamente para aumentar su estabilidad y su muy específica actividad a lo largo de un amplio intervalo de temperaturas.

Physical form

Se suministra como > = 2 mg/ml en Tris-HCl 25 mM, pH 8,0, 50 mM NaCl 50 mM, TCEP 1 mMy glicerol al 50 %

disolución acuosa de glicerol

Preparation Note

Reactivos de desanclaje
Prepare un tampón de diálisis reciente. El tampón de diálisis debe optimizarse para la solubilidad de la proteína deseada y no debe contener inhibidores de proteasa. El tampón de diálisis también debe ser compatible con los procesos de purificación posteriores, por ejemplo, cantidad mínima de EDTA o DTT si se va a utilizar una columna HIS Select^® para retirar las colas de His escindidas.
Ejemplo de una disolución tampón de diálisis adecuada: Tris-HCl 25 mM, pH 8,0, NaCl 150 - 500 mM, β-mercaptoetanol 14 mM
Esta proteasa del TEV tiene la misma actividad en NaCl 150 mM o NaCl 500 mM e imidazol 400 mM.
Diluya la muestra de proteína específica hasta 1-2 mg/ml con tampón de diálisis. Esto es opcional en el caso de que la proteína específica forme agregados en el tampón de diálisis. Guarde una pequeña alícuota como control para el análisis mediante PAGE. Puede añadirse EDTA a una concentración final de 0,5 mM si se eluirá la proteína específica de la columna HIS-Select^® y si el EDTA es compatible con la proteína.
Agregue la proteasa del TEV en una proporción de proteasa a proteína específica de 1:100 (p/p) o 10 000 unidades (1 mg) de proteasa del TEV por 100 mg de proteína. No es necesario calcular la relación molar. La proteasa TEV pueden añadirse directamente a la proteína. No es necesario cambiar el tampón ni diluir la proteasa TEV. La proporción óptima debe determinarse empíricamente. Una proporción proteasa a proteína específica (p/p) de 1:50 a 1:200 debe proporcionar un intervalo eficaz para la mayoría de las proteínas.
Dialice contra el tampón de diálisis a 4 °C durante ~ 16 horas. La diálisis está prevista para eliminar el imidazol o el glutatión si se utilizan columnas HIS-Select^® o de afinidad con glutatión para eliminar la etiqueta escindida o la proteasa del TEV después del desanclaje.
Normalmente 1 mg de proteasa TEV escindirá >90 % de 100 mg de una proteína control a 4 °C en 16 horas.

Other Notes

Una unidad de la proteasa TEV escinde >85 % de 3 μg de sustrato control en una hora a pH 8,0 y a 30 °C.

Legal Information

HIS-Select is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Información de seguridad

• Clase de almacenamiento: 10 - Combustible liquids
• wgk: WGK 2
• flash_point_f: Not applicable
• flash_point_c: Not applicable