The calcium acetate buffer salt content is lot-dependent and may range from 2–30% (w/w) and cannot be relied upon as sufficient for reconstitution in PBS. Note that Ca2+ can precipitate with phosphate in PBS. Stock solutions are typically stored at -20 °C. The stability of the material in solution, when stored at -80°C, has not been evaluated. Please see the link below to review additional information available in the product datasheet:
https://www.sigmaaldrich.com/deepweb/assets/sigmaaldrich/product/documents/261/782/p5147pis-ms.pdf
P5147
Proteasa from Streptomyces griseus
Type XIV, ≥3.5 units/mg solid, powder
Sinónimos:
Actinasa E, Pronasa E
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Acerca de este artículo
Número CAS:
UNSPSC Code:
12352204
eCl@ss:
32160410
EC Number:
232-909-5
NACRES:
NA.54
MDL number:
Specific activity:
≥3.5 units/mg solid
Biological source:
Streptomyces griseus
Servicio técnico
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Streptomyces griseus
Quality Segment
type
Type XIV
form
powder
specific activity
≥3.5 units/mg solid
solubility
10 mM NaAc (pH 7.5) and 5 mM CaAc: soluble 0.2 mg/mL at 37 °C, clear, colorless to tan
shipped in
wet ice
storage temp.
−20°C
General description
Completamente inactivada al calentarse por encima de 80 °C durante 15 a 20 minutos.
Application
Esta enzima es más activa a un intervalo de pH más elevado que la proteasa alcalina conocida, mostrando actividad proteolítica incluso en disolución de NaOH 0,2 N. Esta enzima es útil para la proteólisis de proteínas insolubles y para la investigación de la estructura de las proteínas.
La proteasa es una enzima utilizada para romper las proteínas hidrolizando los enlaces peptídicos. La proteasa se utiliza para degradar las proteínas, estudiar los inhibidores de proteasas y estudiar la cinética de inactivación térmica. La proteasa se utiliza en los procedimientos de aislamiento de ácidos nucleicos en incubaciones. Se ha utilizado la proteasa de Streptomyces griseus en investigaciones cristalográficas y cinéticas del complejo covalente formado por aldehídos de tetrapéptidos y serín proteasas[1].
La proteasa se utiliza normalmente en los procedimientos de aislamiento de ácidos nucleicos en incubaciones de 0,5 a 3,0 horas complementadas con dodecilsulfatosódico al 0,2 % y EDTA 10mM.
La enzima de Sigma se ha utilizado para la digestión y el análisis de complejos antitrombina-heparina.[2] Se ha utilizado también para el aislamiento de almidón resistente a enzimas.
La proteasa de Streptomyces griseus se ha utilizado:
- para la digestión de tejido del núcleo pulposo (NP)
- en la catálisis de la reacción de Mannich en cascada (onepot) asimétrica
- para desproteinización del almidón[3]
- digestión de cortes cerebrales para la disociación celular
Biochem/physiol Actions
Este producto es una mezcla de un mínimo de tres actividades caseinolíticas y una actividad aminopeptidasa.[4] Las enzimas caseinolíticas se nombraron como tripsina de Streptomyces griseus Proteasa A, Streptomyces griseus Proteasa B y Streptomyces griseus. Este producto puede utilizarse cuando se requiere una degradación extensa o completa de la proteína. Esta mezcla de proteasas es muy inespecífica y puede digerir hasta >70 % de la caseína a aminoácidos.
La proteasa cataboliza las proteínas mediante hidrólisis de los enlaces peptídicos. Las proteasas son inactivadas por los inhibidores de la serina del centro activo, como el fluoruro de fenilmetilsulfonilo (PMSF) y el diisopropilfluorofosfato. La proteasa de Streptomyces griseus es una mezcla de como mínimo tres actividades proteolíticas, entre ellas una serín proteasa extracelular. Las proteasas de serina exhiben una amplia variedad de especificidades de sustrato, que se creen mediadas por un centro activo compuesto por un resto de Asp, un resto de His y uno de Ser en la molécula. Esta enzima prefiere hidrolizar los enlaces peptídicos del lado carboxilo de los ácidos glutámico o aspártico.
Mezcla de como mínimo tres actividades proteolíticas, entre ellas una serín proteasa extracelular. En general, las proteasas de serina exhiben una amplia variedad de especificidades de sustrato, que se creen mediadas por un centro activo compuesto de un resto de Asp, uno de His y uno de Ser en la molécula. Esta enzima prefiere hidrolizar los enlaces peptídicos del lado carboxilo de los ácidos glutámico o aspártico.
Features and Benefits
- muy estable en el intervalo de pH de 5,0 a 9,0, con una actividad máxima a pH 8,8
- compatible con muchos tampones de aislamiento de ADN y ARN
- amplia especificidad de sustrato
Preparation Note
Recolectada del caldo de cultivo de S. griseus.
Analysis Note
Contiene acetato de calcio.
Other Notes
Una unidad hidrolizará la caseína para producir color equivalente a 1,0 μmol (181 μg) de tirosina por minuto a pH 7,5 y 37 °C (color por el reactivo Folin-Ciocalteu).
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Este artículo | |||
|---|---|---|---|
| biological source Streptomyces griseus | biological source - | biological source - | biological source - |
| specific activity ≥3.5 units/mg solid | specific activity ≥45,000 proteolytic units/g dry wt | specific activity ≥70,000 proteolytic units/g dry wt | specific activity ≥15 units/mg solid |
| form powder | form lyophilized | form lyophilized | form powder |
| shipped in wet ice | shipped in ambient | shipped in ambient | shipped in - |
| solubility 10 mM NaAc (pH 7.5) and 5 mM CaAc: soluble 0.2 mg/mL at 37 °C, clear, colorless to tan | solubility water: 10 mg/mL | solubility water: 10 mg/mL | solubility - |
| storage temp. −20°C | storage temp. 2-8°C | storage temp. 2-8°C | storage temp. −20°C |
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signalword
Danger
hcodes
Hazard Classifications
Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
target_organs
Respiratory system
Clase de almacenamiento
11 - Combustible Solids
wgk
WGK 2
flash_point_f
Not applicable
flash_point_c
Not applicable
ppe
Eyeshields, Gloves, type N95 (US)
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Is the calcium actate buffer salt present in this product sufficient to allow reconstitution of P5147 in PBS, then storage at -80C for 1 year in 1mL aliquots?
1 answer-
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Is it possible to store P5147 at -80°C after reconstitution?
1 answer-
There is no specific information available about storing the enzyme at -80°C once it has been reconstituted.
Helpful?
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How should Product P5147, Protease from Streptomyces griseus, be reconstituted and how should a stock solution be prepared?
1 answer-
This product can be dissolved in 0.01 M sodium acetate with 0.005 M calcium acetate at pH 7.5 at 37°C; at 0.2 mg/mL, this yields a clear solution which ranges from colorless to light tan. Calcium ion is recommended for protection from autolysis. The activity of a dilute enzyme solution containing 0.01 to 0.1 M calcium ion was stable over 24 hours at neutral pH at 2-8°C. Pronase E is stable at 4°C for at least six months. Stock solutions of 5 to 20 mg/mL in water are usually stored at -20°C.
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What is the Department of Transportation shipping information for this product?
1 answer-
Transportation information can be found in Section 14 of the product's (M)SDS.To access the shipping information for this material, use the link on the product detail page for the product.
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Is Product P5147, Protease from Streptomyces griseus, also described as "Pronase"?
1 answer-
"Pronase E" is the name given to a group of proteolytic enzymes produced by Streptomyces griseus K-1. At least 10 proteases are in the mixture, five serine-type proteases, two zinc endopeptidases, two zinc leucine aminopeptidases, and one zinc carboxypeptidase.
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Under what conditions can Product P5147, Protease from Streptomyces griseus, be used to digest protein?
1 answer-
For DNA isolation, Pronase E is usually prepared as a stock solution, and prior to storage at -20°C, the solution is first heated to 56°C for about 15 minutes, then incubated at 37°C for 1 hour. This encourages self-digestion, to eliminate DNAse and RNAse contamination. The enzyme is added to a DNA sample (in the presence of 0.5-1%(w/v) SDS to disrupt DNA protein interactions) typically at 250-500 μg protein/mL, then incubated at 37°C for 1-4 hours. For protein hydrolysis, dissolve about 0.2 μmol of protein in 0.2 mL of 50 mM ammonium bicarbonate buffer at pH 8 (or phosphate buffer pH 7). Add Pronase to 1% (w/w) and incubate at 37°C for 24 hours. It may be necessary to add aminopeptidase M at 4% (w/w) and incubate at 37°C for another 18 hours.
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Does Product P5147, Protease from Streptomyces griseus, contain calcium acetate?
1 answer-
This product contains calcium acetate buffer salt. The amount of calcium acetate present will vary for each lot number and has been observed to range from 2 - 30% (w/w).
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