BGALS-RO

ββ-Glucuronidasa

from E. coli K 12

• Número CE: 3.2.1.31 (BRENDA, IUBMB)
• NACRES: NA.28
• UNSPSC Code: 12352204
• Biological source: Escherichia coli K12

Propiedades

• biological source: Escherichia coli K12
• form: solution
• mol wt: M_r ~220 kDa
• packaging: pkg of 1 mL (03707580001), pkg of 15 mL (03707601001), pkg of 5 mL (03707598001)
• manufacturer/tradename: Roche
• storage condition: (Keep container tightly closed in a dry and well-ventilated place.)
• parameter: 48 °C optimum reaction temp.
• technique(s): activity assay: suitable
• color: colorless
• optimum pH: 6.0-6.5
• solubility: water: soluble
• suitability: suitable for enzyme test
• UniProt accession no.: , P05804
• application(s): detection; sample preparation
• storage temp.: 2-8°C
• Gene Information: Escherichia coli ... uidA(946149)

Descripción

General description

Glucuronidasa a 25 °C, o 140 U/mg a 37 °C, a pH 7 con 4-nitrofenil-β-D-glucurónido como sustrato; 1 ml de β-glucuronidasa contiene al menos 140 U a 37 °C.

Application

Las β-glucuronidasas se han utilizado ampliamente en investigación y en laboratorios analíticos para la hidrólisis enzimática de los β-glucurónidos de esteroide. La β-glucuronidasa se utiliza:

• para la hidrólisis de los conjugados de esteroides (glucurónidos) de la orina (pH 6,0–6,5)[1][2]
• en el análisis de dopaje
• para la detección de benzodiacepinas en pequeñas dosis.
• durante la preparación de la muestra para escindir los glucurónidos antes de la GC-MS, la HPLC, inmunoanálisis u otros métodos analíticos.

Se ha utilizado para la hidrólisis de enterolactona plasmática, testosterona y glucurónido de epitestosterona.[3]

Biochem/physiol Actions

Hidroliza el ácido glucurónico terminal que está unido mediante un enlace β a monosacáridos, oligosacáridos o polisacáridos o al fenol.

La glucuronidación es uno de los principios básicos del metabolismo. Muchas de las sustancias presentadas al cuerpo humano experimentan un procesamiento metabólico consistente en la conjugación con ácido glucurónico mediante las UDP-glucuronosiltransferasas (UGT). βLa β-glucuronidasa, también conocida como β-D-glucuronósido glucuronosohidrolasa, cataliza la transferencia de un grupo glucuronil a muchas moléculas endógenas y exógenas biológica y farmacológicamente activas. El glucurónido es, en general, más soluble, menos tóxico y excretado con mayor facilidad por el organismo humano que la molécula original. Para analizar esos conjugados con medicamento que están presentes en los líquidos corporales, como la orina y el plasma, es necesaria la desconjugación del glucurónido. La hidrólisis enzimática previa a la detección es esencial para conseguir una elevada sensibilidad durante el análisis. Después de la hidrólisis, la muestra puede analizarse mediante espectroscopia de masas, cromatografía de gases, HPLC, inmunoanálisis u otros métodos analíticos.[4]

Features and Benefits

βLa β-glucuronidasa de E. coli es muy específica para los β-glucurónidos, y es capaz de hidrolizar muy deprisa los β-glucurónidos de esteroide, así como escindir muchos otros tipos de glucurónidos, como las benzodiacepinas, los opioides y los cannabinoides. βLa β-glucuronidasa se utiliza para la hidrólisis enzimática de los glucurónidos en los líquidos biológicos, principalmente la orina. Las sustancias utilizadas para dopaje se conjugan con glucurónidos, lo que significa que los análisis de dopaje eficaces dependen muy a menudo de la escisión enzimática de las moléculas de fármaco conjugadas mediante una β-glucuronidasa.[4]

• Realización de análisis rápidos debido a la elevada actividad específica de la enzima.
• Cribado rápido de esteroides, benzodiacepinas, cannabinoides y opioides.
• Ahorro de tiempo al desarrollar el procedimiento sin necesidad de limpiar la reacción ni de amortiguar la orina.

Physical form

Disolución en glicerol al 50%, pH aproximado de 6,5
(15 ml en un frasco)

Other Notes

La enzima β-glucuronidasa de E. coli carece en esencia de actividad sulfatasa y es especialmente eficiente en la degradación de conjugados de esteroides y benzodiacepinas.
Sólo para investigación en ciencias de la vida. No indicada para procedimientos de diagnóstico.

La unidad internacional de actividad β-glucuronidasa es la actividad enzimática que aumenta la tasa de liberación del 4-nitrofenol del 4-nitrofenil-β-D-glucurónico (4NPG) a una temperatura de +25 ºC y un pH de 7,0 por 1 μM.
Antes se utilizaba la unidad Fishman. Esta unidad Se ajusta a la liberación de fenolftaleína de su glucurónido (PPG). No es posible medir las actividades relativas de diferentes preparaciones para los β-glucurónidos de esteroide comparando sus actividades con respecto al PPG. Muchas preparaciones no catalizan igualmente la hidrólisis del PPG, el 4NPG o los diversos β-glucurónidos de esteroide en orina. La elección del 4NPG como sustrato patrón se basa en las siguientes consideraciones:

• Las concentraciones de Michaelis para los dos sustratos son similares (K_M = 2 ×10^-4 M para 4 NPG y K_M = 6 ×10^-5 M para PPG), pero las tasas correspondientes de hidrólisis difieren:
• El 4NPG se hidroliza a una velocidad unas 5 veces mayor que el PPG;
• Para el PPG, se produce inhibición por exceso de sustrato; esto no se observa utilizando 4NPG.

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Información de seguridad

• Clase de almacenamiento: 12 - Non Combustible Liquids
• wgk: WGK 1
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