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Master mix Fast Start SYBR Green

sufficient for 500 reactions, sufficient for 5000 reactions, suitable for qPCR, suitable for RT-qPCR

• NACRES: NA.55
• UNSPSC Code: 41106300

Proprietà

• usage: sufficient for 500 reactions, sufficient for 5000 reactions
• feature: hotstart, dNTPs included
• manufacturer/tradename: Roche
• packaging: pkg of 500 x 20 μL reactions (04673484001), pkg of 5000 x 20 μL reactions (04673492001)
• technique(s): RT-qPCR: suitable, qPCR: suitable, whole genome amplification: suitable
• input: purified DNA
• detection method: probe-based

Descrizione

General description

Master mix Fast Start SYBR Green; istruzioni per l′uso

La master mix FastStart^™ SYBR^™ Green è una mix pronta all′uso e senza ROX per reazioni hot start per PCR quantitativa (qPCR) e trascrizione inversa (RT)-qPCR adatta a tutti i sistemi per real time PCR ad eccezione degli strumenti LightCycler^®. Questa master mix semplifica la preparazione delle reazioni per il rilevamento e l'analisi del DNA. In combinazione con la macchina per real-time PCR, con i primer appropriati e con una sonda a idrolisi, la master mix FastStart^™ TaqMan^® Probe consente un rilevamento e una quantificazione molto sensibili di specifiche sequenze di DNA.
Il SYBR^™ Green I è un colorante specifico per il DNA a doppia elica. Incluso nella miscela di reazione, si lega ai prodotti di PCR amplificati ad ogni fase di sintesi. L'amplicone viene quindi rilevato grazie alla sua fluorescenza.
È stato dimostrato che i protocolli che fanno uso di hot start migliorano in modo significativo la specificità, la sensibilità e la resa della PCR. I gruppi bloccanti termolabili posti su alcuni dei residui amminoacidici della DNA polimerasi Taq FastStart^™ rendono l'enzima modificato inattivo a temperatura ambiente. Questo fa sì che non si verifichi alcun allungamento durante la fase in cui i primer possono legarsi in modo non specifico. La taq DNA polimerasi FastStart^™ viene attivata rimuovendo i gruppi bloccanti mediante alta temperatura (cioè durante la fase di pre-incubazione a + 95°C).
La master mix FastStart^™ SYBR^™ Green può essere utilizzata per l′amplificazione e il rilevamento di qualsiasi target di DNA o cDNA, compresi quelli ricchi di GC o AT. Tuttavia, è necessario adattare il protocollo di rilevamento alle condizioni di reazione del proprio strumento di real-time PCR e progettare i primer specifici per ciascun target.
E′ possibile combinare questa master mix con il kit Transcriptor First Strand cDNA Synthesis per ottenere risultati eccellenti nella qRT-PCR in due fasi.

Application

La master mix FastStart^™ SYBR^™ Green Master che utilizza SYBR^™ Green I come metodo di rilevazione è usata in qPCR e nella qRT-PCR a due fasi. È anche usata:

• nella reazione a catena della polimerasi (PCR) quantitativa per quantificare il titolo dei virus adeno-associati (AAV)
• in qPCR per determinare i livelli di espressione dei geni Col6a1-3 relativamente alla gliceraldeide 3-fosfato deidrogenasi (GAPDH)
• nella reazione a catena della polimerasi quantitativa real-time (qRT-PCR) dell′mRNA del recettore-1 per gli estrogeni accoppiato a proteine G (GPER)
• in qRT-PCR per studi di espressione genica

La master mix FastStart^™ SYBR^™ Green può essere utilizzata con qualsiasi strumento per real-time qPCR ad eccezione degli strumenti LightCycler^®.

Features and Benefits

• Migliora la sensibilità e la specificità della PCR:

affidati alla mix per FastStart Taq DNA Polymerase per ridurre al minimo la formazione di prodotti di amplificazione aspecifici utilizzando una PCR hot start.

• Evita la sovrastima dei risultati della qPCR:

elimina i prodotti di amplificazione aspecifici e i dimeri di primer che aumenterebbero la quantità di SYBR Green I legato quantificato.

• Amplifica e rivela un′ampia gamma di bersagli DNA e cDNA:

amplifica frammenti lunghi fino a 500 bp, inclusi quelli ricchi in GC- o AT. Adatta a qualsiasi strumento per real-time PCR ad eccezione degli strumenti LightCycler^® .

• Utilizzare la master mix con qualsiasi strumento per real-time PCR ad eccezione degli strumenti LightCycler^® :

è′ possibile scegliere tra due formulazioni: con o senza il colorante di riferimento Rox.

• Risparmia tempo e fatica nella messa a punto della qPCR:

affidati a questa master mix di facile utilizzo per eliminare la necessità di miscelare i componenti, di dosare il MgCl2, e di eseguire altri passaggi di ottimizzazione, con grande risparmio di tempo.

• Previeni i falsi positivi risultanti da contaminazione da carry over:

la mix contiene dUTP e può essere utilizzata con uracil-DNA glicosilasi per evitare eventuali contaminazioni di DNA amplificato proveniente dalle precedenti reazioni di PCR.

Analysis Note

Test funzionale: ogni lotto è testato per le prestazioni in qPCR utilizzando tre tipi di templato: un templato ricco di GC, un templato ricco di AT e un templato lungo (circa 440 bp).

Other Notes

Target per qPCR
In linea di principio, la master mix FastStart SYBR Green può essere utilizzata per l'amplificazione e il rilevamento di qualsiasi target di DNA o cDNA, compresi quelli ricchi di GC o AT. Tuttavia, per ogni target, è necessario:

• adattare il protocollo di rilevamento alle condizioni di reazione adatte al proprio strumento per real-time PCR e
• disegnare i primer da PCR specifici per quel determinato target.

Per raccomandazioni generali fare riferimento al manuale per l′operatore del proprio strumento per real-time PCR.
Due versioni di mix disponibili
La master mix è disponibile in due forme: - una contenente il colorante di riferimento ROX e una senza ROX.
Prevenzione della contaminazione da carryover
Questa master mix contiene dUTP, che sarà incorporato nei prodotti PCR per aiutare a prevenire i falsi positivi derivanti dalla contaminazione da carryover. Nelle PCR successive, è possibile aggiungere l′Uracil-DNA Glicosilasi che degraderà gli eventuali contaminanti da carryover contenenti uracile (cioè i prodotti delle amplificazioni da PCR precedenti).
qRT-PCR
Combina questa master mix con il nostro Kit Transcriptor First Strand cDNA Synthesis per effettuare una qRT-PCR a due step. Questo kit fornisce risultati eccellenti e funziona in modo efficiente con tutti gli strumenti per real-time PCR

Da utilizzare solo per ricerca nel settore life science. Non usare a scopo diagnostico.

La Master mix FastStart SYBR Green, con concentrazione 2x, contiene: Taq DNA polimerasi FastStart, tampone di reazione, nucleotidi (dATP, dCTP, dGTP, dUTP) e il colorante SYBR Green I.

Legal Information

SYBR is a trademark of Thermo Fisher Scientific or its subsidiaries

FastStart is a trademark of Roche

LightCycler is a registered trademark of Roche

TaqMan is a registered trademark of Roche Molecular Systems, Inc.

Informazioni sulla sicurezza

• Classe di stoccaggio: 12 - Non Combustible Liquids
• Che succede?: WGK 1
• Punto di infiammabilità (°F): does not flash
• Punto di infiammabilità (°C): does not flash