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Permettici di aiutartibiological source
Escherichia coli K12
form
solution
mol wt
Mr ~220 kDa
packaging
pkg of 1 mL (03707580001), pkg of 15 mL (03707601001), pkg of 5 mL (03707598001)
manufacturer/tradename
Roche
storage condition
(
parameter
48 °C optimum reaction temp.
technique(s)
activity assay: suitable
color
colorless
optimum pH
6.0-6.5
solubility
water: soluble
suitability
suitable for enzyme test
UniProt accession no.
, P05804
application(s)
detection
sample preparation
storage temp.
2-8°C
Gene Information
Escherichia coli ... uidA(946149)
General description
Glucuronidasi a 25 °C, o 140 U/mg a 37 °C, a pH 7 con 4-nitrofenil-β-D-glucuronide come substrato; 1 ml β-Glucuronidasi contiene non meno di 140 U a 37 °C.
Application
Le β-glucuronidasi sono utilizzate diffusamente nei laboratori di ricerca e nei laboratori di analisi per l'idrolisi enzimatica dei β-glucuronidi steroidei. La β-Glucuronidasi è usata:
- per l′idrolisi di coniugati steroidei (glucuronidi) in campioni di urine (pH 6,0–6,5)
- in analisi di doping
- per la rivelazione di benzodiazepine in piccole quantità
- per scindere i glucuronidi durante la preparazione di campioni destinati ad analisi GC-MS, HPLC, analisi immunologiche o analisi di altro genere.
Biochem/physiol Actions
La glucuronazione è uno dei principi base del metabolismo. Molte sostanze introdotte nel corpo umano subiscono un processo metabolico che include la coniugazione con acido glucuronico da parte delle UDP-glucuronosiltransferasi (UGT). βLa b-gucuronidasi, detta anche β-D-glucuronoside glucuronosoidrolasi, catalizza il trasferimento di un gruppo glucuronilico su diverse molecole biologiche e farmacologicamente attive, sia endogene che esogene. Il glucuronide è in generale più solubile e meno tossico e viene più facilmente escreto dal corpo umano rispetto alla molecola originale. Per analizzare questi coniugati di molecole farmacologiche presenti nei fluidi corporei, come urina e plasma, è necessaria la deconiugazione del glucuronide. L'idrolisi enzimatica prima del rilevamento è essenziale per raggiungere un'elevata sensibilità durante l'analisi. Dopo l′idrolisi il campione può essere analizzato mediante spettroscopia di massa, gascromatografia, HPLC, saggi immunologici o altri metodi analitici.
Scinde l'acido β-glucuronico terminale legato a mono-, oligo- o polisaccaridi o a fenolo.
Features and Benefits
βLa β-glucuronidasi di E. Coli è altamente specifica per i β-glucuronidi ed è in grado di idrolizzare molto rapidamente i β-glucuronidi degli steroidi e di scindere molti altri tipi di glucuronidi, come quelli di benzodiazepine, oppioidi e i cannabinoidi. βLa β-glucuronidasi è utilizzata per l'idrolisi enzimatica dei glucuronidi nei fluidi biologici, principalmente le urine. Le sostanze utilizzate per il doping sono glucurono-coniugate, il che significa che un'efficace analisi antidoping si basa molto spesso sulla scissione enzimatica delle molecole coniugate della sostanza d′abuso da parte della β-glucuronidasi.
- Analisi rapide grazie all'elevata attività specifica degli enzimi′.
- Screening rapido di steroidi, benzodiazepine, cannabinoidi e oppioidi.
- Risparmio di tempo grazie ad una procedura che non richiede né la purificazione della reazione, né di tamponare le urine.
Physical form
Soluzione in glicerolo al 50%, pH circa 6,5
(15 mL in un flacone)
(15 mL in un flacone)
Other Notes
L'unità internazionale dell'attività della β-glucuronidasi è rappresentata dalla quantità di enzima che aumenta il tasso di rilascio del 4-nitrofenolo dal 4-nitrofenil -β-D-glucuronide (4NPG) di 1 μM alla temperatura di +25 °C e a pH 7,0.
In precedenza veniva utilizzata l′unità di Fishman. Questa unità misura il rilascio di fenolftaleina dal suo glucuronide (PPG). Non è possibile misurare le attività relative di diverse preparazioni per i β-glucuronidi di steroidi confrontando le loro attività rispetto al PPG. Molte preparazioni non catalizzano allo stesso modo nelle urine l'idrolisi di PPG, 4NPG o dei vari β-glucuronidi steroidei. La scelta del 4NPG come substrato standard si basa sulle seguenti considerazioni:
In precedenza veniva utilizzata l′unità di Fishman. Questa unità misura il rilascio di fenolftaleina dal suo glucuronide (PPG). Non è possibile misurare le attività relative di diverse preparazioni per i β-glucuronidi di steroidi confrontando le loro attività rispetto al PPG. Molte preparazioni non catalizzano allo stesso modo nelle urine l'idrolisi di PPG, 4NPG o dei vari β-glucuronidi steroidei. La scelta del 4NPG come substrato standard si basa sulle seguenti considerazioni:
- Le costanti di Michaelis per i due substrati sono simili (KM = 2 ×10-4 M per 4 NPG e KM = 6 ×10-5 M per PPG), ma i corrispondenti tassi di idrolisi differiscono:
- Il 4NPG viene scisso circa 5 volte più velocemente del PPG;
- Nel caso del PPG si verifica l'inibizione da parte del substrato in eccesso, cosa che non si osserva con il 4NPG.
La β-glucuronidasi da E. coli è essenzialmente priva di attività solfatasica ed è particolarmente efficiente nella scissione dei coniugati di steroidi e benzodiazepine.
Da utilizzare solo per ricerca nelle scienze naturali. Non usare in procedure diagnostiche.
Da utilizzare solo per ricerca nelle scienze naturali. Non usare in procedure diagnostiche.
Legal Information
La vendita del prodotto non esaurisce né garantisce alcun diritto su brevetti di terzi, compresi i brevetti di società del gruppo F. Hoffmann - La Roche AG, in particolare per l'uso di anticorpi modificati ottenuti utilizzando questo prodotto.
Classe di stoccaggio
12 - Non Combustible Liquids
Che succede?
WGK 1
Punto di infiammabilità (°F)
No data available
Punto di infiammabilità (°C)
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