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Informazioni su questo articolo
UNSPSC Code:
12352203
NACRES:
NA.32
eCl@ss:
32160702
Clone:
polyclonal
Species reactivity:
human, mouse
Application:
ChIP, WB
Citations:
196
Servizio Tecnico
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Permettici di aiutartibiological source
rabbit
Quality Segment
clone
polyclonal
purified by
using Protein A
species reactivity
human, mouse
manufacturer/tradename
ChIPAb+, Upstate®
technique(s)
ChIP: suitable, western blot: suitable
NCBI accession no.
UniProt accession no.
shipped in
dry ice
Gene Information
human ... H3F3B(3021)
General description
17 kDa
La metilazione degli istoni può verificarsi su due diversi residui: arginina o lisina. Essa può essere associata all'attivazione o alla repressione della trascrizione, a seconda del residuo metilato. La lisina 27 dell'istone H3 può essere mono-, di- o trimetilata (istone H3 monometil Lys27, istone H3 dimetil Lys27 o istone H3 trimetil Lys27) da parte di diverse istone metiltransferasi come EZH2 o NSD3. La metilazione di questo residuo è associata principalmente alla repressione trascrizionale.
Tutti gli anticorpi ChIPAb+ vengono singolarmente convalidati per confermare la precipitazione della cromatina, ogni lotto,
sempre. Ogni set di anticorpi ChIPAb+ comprende primer di controllo (ogni lotto testato mediante qPCR) per convalidare biologicamente i tuoi risultati di IP in un contesto locus-specifico. Per permettere ai ricercatori di convalidare i protocolli di ChIP quando usano i nostri anticorpi nel loro specifico contesto cromatinico, si forniscono anche il protocollo della qPCR e le sequenze dei primer.
Ogni set comprende anche un anticorpo di controllo negativo per verificare la specificità della reazione di ChIP. Il set trimetil-istone H3 (Lys27) ChIPAb+ comprende l'anticorpo anti-trimetil-istone H3 (Lys27), un anticorpo di controllo negativo (IgG di coniglio purificate) e primer per qPCR che amplificano una regione di 139 bp dell′alfa-satellite umano. Gli anticorpi anti-trimetil-istone H3 (Lys27) e i controlli negativi sono forniti in un formato di reazione "per ChIP" scalabile e possono essere utilizzati per convalidare funzionalmente la precipitazione della cromatina associata al trimetil-istone H3 (Lys27).
sempre. Ogni set di anticorpi ChIPAb+ comprende primer di controllo (ogni lotto testato mediante qPCR) per convalidare biologicamente i tuoi risultati di IP in un contesto locus-specifico. Per permettere ai ricercatori di convalidare i protocolli di ChIP quando usano i nostri anticorpi nel loro specifico contesto cromatinico, si forniscono anche il protocollo della qPCR e le sequenze dei primer.
Ogni set comprende anche un anticorpo di controllo negativo per verificare la specificità della reazione di ChIP. Il set trimetil-istone H3 (Lys27) ChIPAb+ comprende l'anticorpo anti-trimetil-istone H3 (Lys27), un anticorpo di controllo negativo (IgG di coniglio purificate) e primer per qPCR che amplificano una regione di 139 bp dell′alfa-satellite umano. Gli anticorpi anti-trimetil-istone H3 (Lys27) e i controlli negativi sono forniti in un formato di reazione "per ChIP" scalabile e possono essere utilizzati per convalidare funzionalmente la precipitazione della cromatina associata al trimetil-istone H3 (Lys27).
Immunogen
Epitopo: Trimetil Lys27
Peptide sintetico con due ramificazioni coniugato con KLH contenente la sequenza ...AR(me3K)SAP..., in cui me3K corrisponde alla trimetil-lisina al residuo 27 dell′istone H3 umano.
Application
Anticorpo anti-trimetil-istone H3 (Lys27) convalidato per ChIP & set di primer che comprende l′anticorpo per ChIP & i primer specifici di controllo per PCR utilizzati per l′immunoprecipitazione di H3K27Me3.
Categoria di ricerca
Epigenetica & funzione nucleare
Epigenetica & funzione nucleare
Immunoprecipitazione della cromatina
La cromatina sonicata ottenuta da 2x106 cellule HeLa è stata immunoprecipitata utilizzando 4 μg di anticorpo anti-trimetil-istone H3 (Lys27) purificato o IgG di coniglio normale e il kit Magna ChIP A (N° Cat. 17-610). L′avvenuto arricchimento dei frammenti di DNA associati al trimetil-istone H3 (Lys27) è stato verificato mediante qPCR utilizzando primer per ChIP specifici per la GAPDH, che fiancheggiano il promotore del gene GAPDH umano, e i primer specifici per il promotore del gene MyoD umano.
Per i dettagli sperimentali, consultare i protocolli del kit EZ-Magna ChIP A (N° Cat. 17-408) o del kit EZChIP (N° Cat. 17-371).
Analisi mediante Western blotting
L′istone H3 ricombinante (corsia 2) e gli estratti acidi di cellule HeLa (corsia 1) sono stati risolti mediante elettroforesi, trasferiti su nitrocellulosa e analizzati con una diluizione 1:5000 di anti-trimetilistone H3 Lys27 (0,4 μg/mL).
Le proteine sono state evidenziate con l′impiego di un anticorpo secondario di capra anti-coniglio coniugato con HRP e un sistema di rivelazione in chemiluminescenza (vedere figure).
La cromatina sonicata ottenuta da 2x106 cellule HeLa è stata immunoprecipitata utilizzando 4 μg di anticorpo anti-trimetil-istone H3 (Lys27) purificato o IgG di coniglio normale e il kit Magna ChIP A (N° Cat. 17-610). L′avvenuto arricchimento dei frammenti di DNA associati al trimetil-istone H3 (Lys27) è stato verificato mediante qPCR utilizzando primer per ChIP specifici per la GAPDH, che fiancheggiano il promotore del gene GAPDH umano, e i primer specifici per il promotore del gene MyoD umano.
Per i dettagli sperimentali, consultare i protocolli del kit EZ-Magna ChIP A (N° Cat. 17-408) o del kit EZChIP (N° Cat. 17-371).
Analisi mediante Western blotting
L′istone H3 ricombinante (corsia 2) e gli estratti acidi di cellule HeLa (corsia 1) sono stati risolti mediante elettroforesi, trasferiti su nitrocellulosa e analizzati con una diluizione 1:5000 di anti-trimetilistone H3 Lys27 (0,4 μg/mL).
Le proteine sono state evidenziate con l′impiego di un anticorpo secondario di capra anti-coniglio coniugato con HRP e un sistema di rivelazione in chemiluminescenza (vedere figure).
Sotto categoria di ricerca
Istoni
Istoni
Biochem/physiol Actions
Prevista reattività crociata con molte specie.
trimetil istone H3 (Lys27)
Packaging
25 saggi per kit, circa 4 μL per immunoprecipitazione della cromatina.
Physical form
Anti-trimetil istone H3 (Lys27) (IgG policlonali di coniglio). Una microprovetta contenente 100 μg di IgG purificate su proteina A in 100 μL di tampone contenente 0,1 M di Tris-glicina, pH 7,4, 0,15 M di NaCl con lo 0,05% di azoturo di sodio. Conservare a -20 °C.
IgG di coniglio normale. Una fiala contenente 125 μg di IgG di coniglio purificate in 125 μL di tampone di conservazione contenente lo 0,1% di azoturo di sodio. Conservare a -20 °C.
Primer per ChIP per alfa-satellite umano. Una microprovetta contenente 75 μL di ciascun primer di controllo specifico per l′alfa-satellite umano ad una concentrazione di 5 μM. Conservare a -20 °C.
FOR: CTG CAC TAC CTG AAG AGG AC
REV: GAT GGT TCA ACA CTC TTA CA
IgG di coniglio normale. Una fiala contenente 125 μg di IgG di coniglio purificate in 125 μL di tampone di conservazione contenente lo 0,1% di azoturo di sodio. Conservare a -20 °C.
Primer per ChIP per alfa-satellite umano. Una microprovetta contenente 75 μL di ciascun primer di controllo specifico per l′alfa-satellite umano ad una concentrazione di 5 μM. Conservare a -20 °C.
FOR: CTG CAC TAC CTG AAG AGG AC
REV: GAT GGT TCA ACA CTC TTA CA
Preparation Note
1 anno a -20 °C dalla data di spedizione
Analysis Note
Controllo
1 fiala contenente 75 μl di ciascun primer di controllo specifico per l′alfa-satellite umano ad una concentrazione 5 μM. Conservare a -20 °C.
FOR: CTG CAC TAC CTG AAG AGG AC
REV: GAT GGT TCA ACA CTC TTA CA
1 fiala contenente 75 μl di ciascun primer di controllo specifico per l′alfa-satellite umano ad una concentrazione 5 μM. Conservare a -20 °C.
FOR: CTG CAC TAC CTG AAG AGG AC
REV: GAT GGT TCA ACA CTC TTA CA
Immunoprecipitazione della cromatina
La cromatina sonicata ottenuta da 3x106 cellule NIH3T3 L1 è stata immunoprecipitata utilizzando 4 μg di anticorpo purificato o IgG di coniglio normale e il kit Magna ChIP® A (N° Cat. 17-610). L′avvenuto arricchimento dei frammenti di DNA associati al trimetil-istone H3
(Lys27) è stato verificato mediante qPCR utilizzando i primer per ChIP specifici per alfa-satellite umano (vedere le figure).
Per i dettagli sperimentali, consultare i protocolli del kit EZ-Magna ChIP A (N° Cat. 17-408) o del kit EZ-ChIP (N° Cat. 17-371).
La cromatina sonicata ottenuta da 3x106 cellule NIH3T3 L1 è stata immunoprecipitata utilizzando 4 μg di anticorpo purificato o IgG di coniglio normale e il kit Magna ChIP® A (N° Cat. 17-610). L′avvenuto arricchimento dei frammenti di DNA associati al trimetil-istone H3
(Lys27) è stato verificato mediante qPCR utilizzando i primer per ChIP specifici per alfa-satellite umano (vedere le figure).
Per i dettagli sperimentali, consultare i protocolli del kit EZ-Magna ChIP A (N° Cat. 17-408) o del kit EZ-ChIP (N° Cat. 17-371).
Other Notes
Anti-trimetil istone H3 (Lys27) policlonale, 1 fiala
Siero policlonale di coniglio controllo, 1 fiala
Set di primer per alfa-satellite umano, 1 fiala
Siero policlonale di coniglio controllo, 1 fiala
Set di primer per alfa-satellite umano, 1 fiala
Legal Information
MAGNA CHIP is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
Disclaimer
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Classe di stoccaggio
12 - Non Combustible Liquids
flash_point_f
Not applicable
flash_point_c
Not applicable
wgk
WGK 2
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