17-10394
Dosage de l'activation de Rac1/Cdc42 par précipitation de billes magnétiques
The Rac1/cdc42 Activation Magnetic Beads Pulldown Assay provides an effective method for detecting Rac & Cdc42 activity in cell lysates with higher yield & easier process utilizing magenetic bead properties.
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About This Item
Code UNSPSC :
12161503
eCl@ss :
32161000
Nomenclature NACRES :
NA.32
Produits recommandés
Niveau de qualité
Espèces réactives
human, rat, mouse
Fabricant/nom de marque
Upstate®
Technique(s)
activity assay: suitable
affinity binding assay: suitable (G-protein)
Numéro d'accès NCBI
Numéro d'accès UniProt
Conditions d'expédition
dry ice
Informations sur le gène
human ... RAC1(5879)
Description générale
Le dosage de l'activation de Rac1/Cdc42 par précipitation de billes magnétiques (n° cat. 17-10394) offre une méthode efficace pour détecter l'activité de Rac et de Cdc42 dans les lysats cellulaires. Ce dosage utilise l'effecteur en aval de Rac/Cdc42, la protéine kinase activée par la p21 (PAK1), pour isoler la forme active liée au GTP de Rac/Cdc42 dans l'échantillon. Le domaine de liaison à p21 (PBD) de PAK1 est exprimé sous la forme d'une protéine de fusion à la GST et couplé à des billes magnétiques. Après séparation sur un portoir magnétique, un immunotransfert est effectué et Rac/Cdc42 activé est détecté grâce à des anticorps monoclonaux spécifiques, puis d'un anticorps secondaire conjugué à la HRP et d'un réactif ECL.
Spécificité
Espèces à réactivité croisée : Homme et souris. Une réaction croisée est envisagée avec toutes les espèces mammifères.
Anticorps anti-Rac1, clone 23A8 : Espèces à réactivité croisée : Homme, souris et rat. La réactivité croisée avec d'autres espèces est inconnue.
Anticorps anti-Cdc42 Espèces à réactivité croisée : Homme, souris, rat et chien. La réactivité croisée avec d'autres espèces est inconnue.
Anticorps anti-Rac1, clone 23A8 : Espèces à réactivité croisée : Homme, souris et rat. La réactivité croisée avec d'autres espèces est inconnue.
Anticorps anti-Cdc42 Espèces à réactivité croisée : Homme, souris, rat et chien. La réactivité croisée avec d'autres espèces est inconnue.
Application
Catégorie de recherche
Signalisation cellulaire
Signalisation
Signalisation cellulaire
Signalisation
Composants
Réactif de dosage Rac1/Cdc42 (Pak-1PBD, billes magnétiques) : 300 µg de Pak-1 PBD dans 150 µL de billes magnétiques de glutathion, fournies sous la forme d'une suspension épaisse de billes à 50 % dans du PBS contenant 50 % de glycérol, pour un volume final de 300 µL.
Anticorps anti-Rac1, clone 23A8 : Un flacon contenant 250 µg d'IgG2a kappa purifiée, dans 250 µL de tampon de conservation (Tris-glycine 0,1 M, pH 7,4, NaCl 0,15 M, contenant 0,05 % d'azide de sodium).
Anticorps anti-cdc42, IgG1 monoclonale de souris : Un flacon contenant 50 μg d'IgG1 de souris purifiée, dans 200 µL de phosphate de sodium 10 mM, pH 7,5, NaCl 75 mM, azide de sodium 0,75 mM, 0,5 mg/mL de BSA et 50 % de glycérol.
Tampon de lavage/lyse au Mg2+, 5X, n° de catalogue 20-168 : Deux flacons contenant chacun 18 mL de MLB 5X : HEPES 125 mM, pH 7,5, NaCl 750 mM, Igepal CA-630 5 %, MgCl2 50 mM, EDTA 5 mM et glycérol 10 %.
GTPγS 100X, 10 mM, n° de catalogue 20-176 : Un flacon contenant 50 µL de GTPγS 10 mM, stock 100X, dans 50 mM de Tris-HCl, pH 7,8, analogue non-hydrolysable du GTP. Suffisant pour marquer 5 mL de lysats cellulaires.
GDP 100X, 100 mM, n° de catalogue 20-177 : Un flacon contenant 50 µL de GDP 100 mM, stock 100X, dans 50 mM de Tris-HCl, pH 7,8. GDP (guanosine 5'-diphosphate) pour le marquage in vitro des protéines G sous forme inactive. Suffisant pour marquer 5 mL de lysats cellulaires.
Anticorps anti-Rac1, clone 23A8 : Un flacon contenant 250 µg d'IgG2a kappa purifiée, dans 250 µL de tampon de conservation (Tris-glycine 0,1 M, pH 7,4, NaCl 0,15 M, contenant 0,05 % d'azide de sodium).
Anticorps anti-cdc42, IgG1 monoclonale de souris : Un flacon contenant 50 μg d'IgG1 de souris purifiée, dans 200 µL de phosphate de sodium 10 mM, pH 7,5, NaCl 75 mM, azide de sodium 0,75 mM, 0,5 mg/mL de BSA et 50 % de glycérol.
Tampon de lavage/lyse au Mg2+, 5X, n° de catalogue 20-168 : Deux flacons contenant chacun 18 mL de MLB 5X : HEPES 125 mM, pH 7,5, NaCl 750 mM, Igepal CA-630 5 %, MgCl2 50 mM, EDTA 5 mM et glycérol 10 %.
GTPγS 100X, 10 mM, n° de catalogue 20-176 : Un flacon contenant 50 µL de GTPγS 10 mM, stock 100X, dans 50 mM de Tris-HCl, pH 7,8, analogue non-hydrolysable du GTP. Suffisant pour marquer 5 mL de lysats cellulaires.
GDP 100X, 100 mM, n° de catalogue 20-177 : Un flacon contenant 50 µL de GDP 100 mM, stock 100X, dans 50 mM de Tris-HCl, pH 7,8. GDP (guanosine 5'-diphosphate) pour le marquage in vitro des protéines G sous forme inactive. Suffisant pour marquer 5 mL de lysats cellulaires.
Qualité
Évaluée en routine en précipitant Rac1-GTP et Cdc42-GTP à partir de lysats de cellules 3T3/A31 et HeLa préalablement chargés avec du GTPγS (les lysats ont été chargés in vitro avec du GTPγS dans le cas de Cdc42-GTP). Les formes précipitées de Rac1-GTP et cdc42-GTP ont été détectées par immunotransfert à l'aide de l'anticorps anti-Rac1 (1 µg/mL).
Stockage et stabilité
À -20 °C pendant 1 an à compter de la date d'expédition.
Informations légales
UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
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Danger
Mentions de danger
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Classification des risques
Aquatic Acute 1 - Aquatic Chronic 2 - Eye Dam. 1
Code de la classe de stockage
10 - Combustible liquids
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