17-643

ChIPAb+-Monomethyl-Histon H3 (Lys27) - durch ChIP validiertes Antikörper- und Primer-Set

serum, from rabbit

• Synonym(e): H3K27me1, Histone H3 (mono methyl K27)
• UNSPSC Code: 12352203
• NACRES: NA.52
• eCl@ss: 32160702
• Clone: polyclonal
• Species reactivity: human, mouse
• Application: ChIP, EMSA, FACS, IF, IHC (p), IP, WB
• Citations: 8

Eigenschaften

• biological source: rabbit
• Quality Segment: 100
• antibody form: serum
• clone: polyclonal
• species reactivity: human, mouse
• species reactivity (predicted by homology): mammals
• manufacturer/tradename: ChIPAb+, Upstate^®
• technique(s): ChIP: suitable, electrophoretic mobility shift assay: suitable, flow cytometry: suitable, immunofluorescence: suitable, immunohistochemistry (formalin-fixed, paraffin-embedded sections): suitable, immunoprecipitation (IP): suitable, western blot: suitable
• NCBI accession no.: NM_003493
• UniProt accession no.: Q66I33
• shipped in: dry ice
• Gene Information: human ... H3F3B(3021)

Beschreibung

General description

17 kDa

Alle ChIPAb+-Antikörper werden einzeln (jede Charge, jedes Mal) für die Chromatin-Immunpräzipitation validiert. Jedes ChIPAb+-Antikörper-Set enthält Kontrollprimer (jede Charge wurde durch qPCR geprüft), um Ihre IP-Ergebnisse im stellenspezifischen Kontext biologisch zu validieren. Das qPCR-Protokoll und die Primer-Sequenzen werden bereitgestellt, was es Forschenden ermöglicht, ChIP-Protokolle zu validieren, wenn sie unseren Antikörper in ihrem Chromatin-Kontext nutzen. Jedes Set enthält außerdem einen Negativkontrolle-Antikörper, um die Spezifizität der ChIP-Reaktion zu gewährleisten.
Das ChIPAb+-Monomethyl-Histon-H3(Lys27)-Set enthält den Anti-Monomethyl-Histon-H3(Lys27)-Antikörper, einen Negativkontrolle-Antikörper (normales Kaninchenserum) und qPCR-Primer, die eine 110-Basenpaar-Region im Promotor des humanen β-Globin-Gens amplifizieren. Das Monomethyl-Histon-H3(Lys27) und die Negativkontrolle-Antikörper werden in skalierbarer „je ChIP“-Reaktionsgröße geliefert und können verwendet werden, um die Ausfällung von Monomethyl-Histon-H3(Lys27)-assoziiertem Chromatin funktionell zu validieren.

Immunogen

Das Monomethyl-Histon-H3(Lys27)-Antiserum wurde gegen ein synthetisches, zweifach verzweigtes Peptid, das die Sequenz …ARmeKSA… enthält, wobei meK dem Monomethyl-Lysin 27 von humanem Histon H3 entspricht, entwickelt.

Application

Chromatin-Immunpräzipitation:
Die erfolgreiche Immunpräzipitation von Monomethyl-Histon-H3(Lys27)-assoziierten DNA-Fragmenten wurde durch qPCR mit ChIP-Kontrollprimern, die den humanen GAPDH-Promotor flankieren, oder Primern, die den humanen β-Globin-Promotor, der in HeLa-Zellen transkriptionell inaktiv ist, amplifizieren, verifiziert (siehe Abbildungen). Für jedes qPCR-Primer-Set wird die prozentuale Eingabe relativ zu Standardkurven dargestellt, wobei die immunpräzipitierte DNA aus Kontrollserum als (-) und Monomethyl-Histon-H3(Lys27) als (+) dargestellt wird.
Bitte beziehen Sie sich für experimentelle Details auf die Protokolle für EZ-Magna A ChiP (Katalognr. 17-408) oder EZ-ChIP (Katalognr. 17-371).

Western-Blot-Analyse und Peptidhemmung:
HeLa-Säureextrakt wurde durch Elektrophorese aufgelöst, auf Nitrocellulose übertragen und mit Anti-Monomethyl-Histon-H3(Lys27) (1:5000, Bahn 1) untersucht oder mit 0,4 μmol/l Histon H3-Peptid mit folgenden Modifikationen vorinkubiert:
Bahn 2: Linear, nicht modifiziert
Bahn 3: Verzweigtes Monomethyl
Bahn 4: Lineares Monomethyl
Bahn 5: Verzweigtes Dimethyl
Bahn 6: Lineares Dimethyl
Bahn 7: Verzweigtes Trimethyl
Bahn 8: Lineares Trimethyl
Die Proteine wurden mit an HRP konjugiertem Anti-Kaninchen-Sekundärantikörper der Ziege und einem Chemilumineszenz-Nachweissystem visualisiert (siehe Abbildungen).

Dieses Set aus ChIP-validiertem ChIPAb+-Monomethyl-Histon-H3(Lys27)-Antikörper und Primer enthält praktischerweise den Antikörper und die spezifischen Kontroll-PCR-Primer.

Forschungs-Unterkategorie
Chromatin-Biologie

Forschungskategorie
Epigenetik & Zellkernfunktion

Biochem/physiol Actions

Monomethyl-Histon H3 (Lys27)

Packaging

25 Assays je Kit, ~4 μl je Chromatin-Immunpräzipitation

Physical form

Anti-Monomethyl-Histon H3 (Lys27) (polyklonales Kaninchen-IgG). Ein Fläschchen mit 100 μl Antiserum mit 0,05 % Natriumazid.

Normales Kaninchenserum. Ein Fläschchen mit 100 μl Antiserum mit 0,05 % Natriumazid.

ChIP-Primer, β-Globin. Ein Fläschchen mit 75 μl von 5 μmol/l jedes Primers, spezifisch für den humanen β-Globin-Promotor.
FÜR: AGG ACA GGT ACG GCT GTC ATC
REV: TTT ATG CCC AGC CCT GGC TC

Preparation Note

Bei -20 °C ab Empfangsdatum 1 Jahr haltbar.

Analysis Note

Chromatin-Immunpräzipitation:
Beschalltes Chromatin aus unbehandelten HeLa-Zellen (1 x 10⁶ Zelläquivalente) wurde einer Chromatin-Immunpräzipitation mit 4 μl von entweder normalem Kaninchen-Antiserum oder Anti-Monomethyl-Histon-H3(Lys27)-Serum und dem Magna ChIP A Kit (Katalognr. 17-610) unterzogen.
Die erfolgreiche Immunpräzipitation von Monomethyl-Histon-H3(Lys27)-assoziierten DNA-Fragmenten wurde durch qPCR mit ChIP-Kontrollprimern verifiziert, die den humanen β-Globin-Promotor flankieren (siehe Abbildungen).
Bitte beziehen Sie sich EZ-Magna ChIP A (Katalognr. 17-408) oder EZ-ChIP (Katalognr. 17-371).

Kontrolle
Einschließlich normales Kaninchenserum als Negativkontrolle-Antikörper und für den humanen β-Globin-Promotor spezifische Primer.

Legal Information

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Disclaimer

Sofern in unserem Katalog oder anderen Begleitdokumenten unserer Produkte nicht anders angegeben, sind unsere Produkte nur für Forschungszwecke vorgesehen und nicht für andere Zwecke zu verwenden, einschließlich, jedoch nicht beschränkt auf unautorisierte kommerzielle Verwendung, zur In-vitro-Diagnostik, für Ex-vivo- oder In-vivo-Therapiezwecke oder jegliche Art der Einnahme oder Anwendung bei Menschen oder Tieren.

Sicherheitshinweise

• Lagerklasse: 10 - Combustible liquids
• wgk: WGK 1