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≥90% (SDS-PAGE)
form
lyophilized
specific activity
≥20000 units/mg protein
mol wt
27 kDa
packaging
pkg of 2 μg (11420488001), pkg of 3 × 2 μg (11054589001)
manufacturer/tradename
Roche
optimum pH
7.0-8.0
pH range
6.5-9.0
storage temp.
2-8°C
General description
Pseudomonas fragi de type sauvage sécrète une métalloprotéase qui clive les liaisons peptidiques du côté N-terminal des petits acides aminés hydrophiles. Une forme mutée de cette souche produit l′endoprotéinase Asp-N de qualité séquençage, qui est isolée sous forme de protéase hautement purifiée et spécifique.
Application
L′endoprotéinase Asp-N de qualité séquençage est utilisée pour les analyses de structure et de séquence des protéines.
Biochem/physiol Actions
L′endoprotéinase Asp-N de qualité séquençage est une métalloprotéase. Dans un tampon phosphate, acétate ou Tris à pH 6,0-8,5, elle clive spécifiquement les liaisons peptidiques du côté N-terminal des résidus d′acide aspartique et cystéique. Si la cystéine est réduite ou alkylée, seules les liaisons -↓-Asp-X sont clivées.
La spécificité de l′endoprotéinase Asp-N de qualité séquençage est vérifiée en utilisant le glucagon comme substrat. Des concentrations élevées d′endoprotéinase Asp-N de qualité séquençage (1 partie d′enzyme pour 10 parties de glucagon, au poids) sont incubées pour détecter toute trace d′impuretés comme les protéases contaminantes.
Inactivation à la chaleur : La réaction de la protéase est arrêtée en faisant bouillir pendant 5 minutes.
La spécificité de l′endoprotéinase Asp-N de qualité séquençage est vérifiée en utilisant le glucagon comme substrat. Des concentrations élevées d′endoprotéinase Asp-N de qualité séquençage (1 partie d′enzyme pour 10 parties de glucagon, au poids) sont incubées pour détecter toute trace d′impuretés comme les protéases contaminantes.
Inactivation à la chaleur : La réaction de la protéase est arrêtée en faisant bouillir pendant 5 minutes.
Preparation Note
Concentration de travail : 2 μg /50 μl d′eau bidistillée
Un flacon (= 2 μg d′enzyme) est dissout dans 50 μl d′eau bidistillée, pour produire un tampon Tris-HCl de concentration 10 mM et pH 7,5.
Solution de travail : Le solvant recommandé est l′eau bidistillée.
Conditions de stockage (solution de travail) : -15 à -25 °C
Une solution dans de l′eau bidistillée est stable pendant une semaine au maximum entre 2 et 8 °C ou pendant un mois entre -15 et -25 °C ; éviter de décongeler plusieurs fois.
Un flacon (= 2 μg d′enzyme) est dissout dans 50 μl d′eau bidistillée, pour produire un tampon Tris-HCl de concentration 10 mM et pH 7,5.
Solution de travail : Le solvant recommandé est l′eau bidistillée.
Conditions de stockage (solution de travail) : -15 à -25 °C
Une solution dans de l′eau bidistillée est stable pendant une semaine au maximum entre 2 et 8 °C ou pendant un mois entre -15 et -25 °C ; éviter de décongeler plusieurs fois.
L′endoprotéinase Asp-N de qualité séquençage lyophilisée est reconstituée dans 50 μl d′eau bidistillée. Cela produit un tampon Tris-HCl de concentration 10 mM et pH 7,5. Pour éviter l′autolyse, la température d′incubation ne doit pas dépasser 37 °C.
Other Notes
Pour la recherche en sciences de la vie uniquement. Ne pas utiliser dans des procédures de diagnostic.
Classe de stockage
11 - Combustible Solids
flash_point_f
does not flash
flash_point_c
does not flash
wgk
WGK 3
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