Accéder au contenu
Merck
Toutes les photos(6)

Key Documents

TRANSRTRO

Roche

Transcriptase inverse Transcriptor

Se connecterpour consulter vos tarifs contractuels et ceux de votre entreprise/organisme


About This Item

Code UNSPSC :
41106313
Nomenclature NACRES :
NA.21

Produit recombinant

expressed in E. coli

Niveau de qualité

Pureté

≥90% (SDS-PAGE)

Forme

liquid

Utilisation

sufficient for 25 reactions
sufficient for 50 reactions
sufficient for 500 reactions

Activité spécifique

0.05 U/mg

Caractéristiques

dNTPs included: no
hotstart: no

Fabricant/nom de marque

Roche

Conditionnement

pkg of 200 reactions (03531287001)
pkg of 25 reactions (03531317001)
pkg of 50 reactions (03531295001)

Technique(s)

RT-PCR: suitable
RT-qPCR: suitable

Couleur

colorless

pH

7.2

Solubilité

water: miscible

Adéquation

suitable for molecular biology

Numéro d'accès UniProt

Application(s)

genomic analysis
life science and biopharma

Méthode de détection

probe-based

Activité étrangère

DNase activity, none detected
Nicking activity, none detected
RNase activity, none detected

Température de stockage

−20°C (−15°C to −25°C)

Description générale

La transcriptase inverse (RT) est une enzyme clé dans les rétrovirus tels que le virus de l'immunodéficience humaine de type 1 (VIH-1). La RT du VIH-1 est constituée de deux sous-unités de 66 kDa et 51 kDa (p66 et p5l). Un rétrovirus endogène humain de la famille des HERV-K code une enzyme transcriptase inverse (RT).
Transcriptase inverse recombinante pour la transcription fiable de fragments d'ARN mesurant jusqu'à 14 kb utilisée en RT-PCR en une étape sur des thermocycleurs et des appareils de PCR en temps réel.

Application

La transcriptase inverse Transcriptor est conçue pour transcrire de l'ARN (ARNm, ARN total, ARN viral et ARN transcrit in vitro) de diverses sources à l'aide de thermocycleurs et d'appareils de PCR en temps réel (appareils LightCycler®, par exemple) pour les besoins suivants :

  • synthèse du premier brin d'ADNc utilisable dans des réactions d'amplification ultérieures
  • RT-PCR de matrices d'ARN riches en GC
  • marquage à la Cy3, à la Cy5, à la DIG, à la biotine et à l'aminoallyle durant la synthèse d'ADNc
  • restauration et clonage des extrémités 5′ et 3′ de l'ARNm par RACE
  • création de banques d'ADNc contenant de longues séquences d'insertion
  • séquençage de l'ADN par la méthode de Sanger
  • séquençage de l'ARN
  • marquage de l'extrémité 3′ de fragments d'ADN
  • production de sondes simple brin pour empreintes génomiques
  • transcription inverse de l'ARN de la protéine E6 du papillomavirus humain, de tissu cortical et striatal, de biopsies musculaires d'échantillons de dystrophie musculaire pseudohypertrophique de Becker et de la structure tige-boucle de micro-ARN d'ovocytes et de cellules endothéliales microvasculaires de cerveau humain (hCMVEC)

Actions biochimiques/physiologiques

La transcriptase inverse du virus de l'immunodéficience humaine de type 1 (RT VIH-1) est essentielle à la conversion catalytique d'un ADN viral simple brin en un ADN linéaire double brin capable de s'intégrer dans les chromosomes de la cellule hôte.

Caractéristiques et avantages

  • Haute sensibilité dans la RT-PCR en deux étapes
La transcriptase inverse Transcriptor s'utilise dans des thermocycleurs et des appareils de PCR en temps réel classiques tels que les appareils LightCycler®.
  • Plus grand nombre de transcrits complets (jusqu'à 14 kb)
Vous pouvez créer des banques d'ADNc contenant de longues séquences d'insertion.
  • Transcription inverse de matrices difficiles
L'enzyme est active à haute température, ce qui permet de dénaturer la structure secondaire de l'ARN (matrices d'ARN riche en GC, par exemple) tout en bénéficiant de conditions réactionnelles optimales.
  • Bon marquage de l'ADNc
Des nucléotides marqués à la cyanine 3 (Cy3), à la cyanine 5 (Cy5), à la digoxigénine (DIG), à la biotine ou à l'aminoallyle sont incorporés durant la synthèse de l'ADNc.

Composants

  • Transcriptase inverse Transcriptor dans un tampon de conservation
  • Tampon de RT Transcriptor, concentré 5×

Qualité

La fonction de chaque lot de transcriptase inverse Transcriptor est systématiquement contrôlée par RT-PCR :

  • avec un thermocycleur classique pour détecter un fragment de 10 kb du gène de la dystrophine humaine, en utilisant comme matériel de départ de l'ARN total de muscle squelettique humain ;
  • avec l'appareil LightCycler® pour détecter 5 × 102 à 5 × 106 copies d'ARN de PBGD humaine transcrit in vitro. Les résultats sont définis par une intensité de fluorescence et des points d'intersection fixes.

Notes préparatoires

Activité volumique : 20 U/μl
Transcription d'ARN cibles longs, rares ou difficiles
La transcriptase inverse Transcriptor est recommandée pour la RT-PCR des cibles suivantes :

  • cibles longues, parce qu'elle est capable de transcrire des matrices d'ARN mesurant jusqu'à 14 kb ;
  • cibles rares, en raison de sa haute sensibilité ;
  • cibles riches en GC, car elle peut être utilisée à haute température (jusqu'à +65 °C) pour éliminer les problèmes liés aux structures secondaires très élaborées.

Marquage dans de nombreuses applications
La transcriptase inverse Transcriptor est également recommandée pour la préparation d'ADNc marqué puisqu'elle fonctionne avec une grande diversité de nucléotides modifiés (dont les dNTP marqués à la Cy3, à la Cy5, à la DIG, à la biotine ou à l'aminoallyle).
Conditions de réaction
La RT Transcriptor fonctionne avec des matrices d'ARNsb et d'ADNsb et nécessite une amorce pour la transcription.

Stockage et stabilité

Éviter les congélations et décongélations répétées.

Autres remarques

Produit destiné uniquement à la recherche en sciences de la vie. Ne pas utiliser dans des procédures de diagnostic.

Informations légales

LightCycler is a registered trademark of Roche

Code de la classe de stockage

12 - Non Combustible Liquids

Classe de danger pour l'eau (WGK)

WGK 1

Point d'éclair (°F)

does not flash

Point d'éclair (°C)

does not flash


Certificats d'analyse (COA)

Recherchez un Certificats d'analyse (COA) en saisissant le numéro de lot du produit. Les numéros de lot figurent sur l'étiquette du produit après les mots "Lot" ou "Batch".

Déjà en possession de ce produit ?

Retrouvez la documentation relative aux produits que vous avez récemment achetés dans la Bibliothèque de documents.

Consulter la Bibliothèque de documents

Pietro Spitali et al.
Journal of cachexia, sarcopenia and muscle, 9(4), 715-726 (2018-04-24)
Analysis of muscle biopsies allowed to characterize the pathophysiological changes of Duchenne and Becker muscular dystrophies (D/BMD) leading to the clinical phenotype. Muscle tissue is often investigated during interventional dose finding studies to show in situ proof of concept and
Human papillomavirus E6 triggers upregulation of the antiviral and cancer genomic DNA deaminase APOBEC3B
Vieira VC
mBio, 5, e02234-e02214 (2014)
Expression profiles and function analysis of microRNAs in postovulatory aging mouse oocytes
Wang TY, et al.
Aging, 9, 1186-1186 (2017)
Tracking disease progression non-invasively in Duchenne and Becker muscular dystrophies
Spitali P, et al.
Journal of Cachexia, Sarcopenia and Muscle, 9, 715-726 (2018)
Identification of an active reverse transcriptase enzyme encoded by a human endogenous HERV-K retrovirus.
Berkhout B, et al.
Journal of Virology, 73(3), 2365-2375 (1999)

Contenu apparenté

RT-qPCR detects specific targets with applications in gene expression and pathogen detection.

RT-qPCR detects specific targets with applications in gene expression and pathogen detection.

RT-qPCR detects specific targets with applications in gene expression and pathogen detection.

RT-qPCR detects specific targets with applications in gene expression and pathogen detection.

Afficher tout

Notre équipe de scientifiques dispose d'une expérience dans tous les secteurs de la recherche, notamment en sciences de la vie, science des matériaux, synthèse chimique, chromatographie, analyse et dans de nombreux autres domaines..

Contacter notre Service technique