LIBDH-RO

Liberase^™ DH de qualité recherche

lyophilized, optimum pH 7.4, optimum reaction temp. 35-37 °C

• NACRES: NA.21
• UNSPSC Code: 12352204
• Biological source: enzyme from Bacillus polymyxa (Protease), enzyme from Clostridium histolyticum (collagenase)

Propriétés

• biological source: enzyme from Bacillus polymyxa (Protease), enzyme from Clostridium histolyticum (collagenase)
• description: high Dispase concentration
• form: lyophilized
• packaging: pkg of 10 mg (05401054001 [2 x 5 mg]), pkg of 100 mg (05401089001 [2 x 50 mg])
• manufacturer/tradename: Roche
• parameter: 35-37 °C optimum reaction temp.
• technique(s): activity assay: suitable
• color: white
• optimum pH: 7.4
• solubility: water: soluble
• application(s): life science and biopharma
• foreign activity: Endotoxin 3 EU/mg
• shipped in: dry ice
• storage temp.: −20°C

Description

General description

La technique de décellularisation la plus courante, par exemple pour la dissociation de tissus et le détachement de cellules, repose sur l'utilisation d'enzymes protéolytiques. Les protéases dégradent la matrice extracellulaire des tissus pour permettre la libération de cellules individuelles ou le détachement de cellules en culture en vue d'un repiquage. Le but de l'isolement des cellules est de maximiser le rendement en cellules dissociées viables et fonctionnelles.
La technologie des enzymes Liberase consiste à obtenir par purification des isoformes de collagénase clostridienne hautement spécifiques et à les mélanger à des protéases neutres hautement spécifiques, selon un rapport optimal, afin de dissocier efficacement les tissus primaires et les cellules en culture. Le mélange Liberase DH de qualité recherche contient de la collagénase I et de la collagénase II d'une grande pureté. Ces deux isoformes de la collagénase, mélangées selon un rapport précis, sont également mélangées à une forte concentration de Dispase^®, protéase neutre non clostridienne.
Les enzymes Liberase sont conçues pour renforcer la qualité et la reproductibilité de la dissociation tissulaire tout en améliorant la viabilité et l'activité fonctionnelle des cellules isolées. Les mélanges enzymatiques purifiés Liberase remplacent les collagénases traditionnelles, qui sont un sous-produit brut et variable de la fermentation de Clostridium histolyticum.

Application

Le mélange enzymatique Liberase^™ DH (riche en Dispase) de qualité recherche est utilisé pour la dissociation de différents types de tissus lorsque le mélange d'enzymes doit être d'une grande pureté pour garantir une viabilité et un rendement cellulaires élevés. La quantité des sous-produits bactériens, comme les endotoxines, est divisée par un facteur pouvant aller jusqu'à plusieurs milliers.
Ce mélange a été utilisé pour la digestion de fragments de tumeurs métastatiques.[1] Il a été utilisé pour détacher des colonies de cellules souches embryonnaires humaines par voie enzymatique.[2]

Features and Benefits

• Optimisez la viabilité et le rendement des cellules isolées

grâce à un mélange enzymatique à plus faible activité clostripaïne et trypsine et à teneur réduite en endotoxines.

• Bénéficiez d'un mélange enzymatique plus spécifique

grâce à des collagénases I et II d'une grande pureté (déterminée par HPLC).

• Obtenez une meilleure reproductibilité expérimentale

grâce à une plus grande uniformité entre les lots.

Preparation Note

Stabilisants : calcium
Concentration de travail du mélange enzymatique Liberase de qualité recherche

Les enzymes Liberase ont une activité spécifique nettement supérieure à celle des collagénases traditionnelles. Cela signifie que la concentration de travail des enzymes Liberase de qualité recherche purifiées, exprimée en mg/ml, est inférieure à celle des collagénases traditionnelles.

Si votre application figure dans la liste des applications Roche sur le site www.collagenase.com, utilisez la concentration de mélange Liberase de qualité recherche recommandée.

Si elle ne figure pas dans la liste, commencez par une concentration de 0,08 à 0,28 unité Wünsch/ml.

Le but est de trouver la concentration de départ la mieux adaptée à vos besoins. Il s'agit d'un point de départ, la concentration finale pouvant varier en raison des différences entre les procédures et les lots de collagénase traditionnelle.

Concentration de travail en collagénase

Multipliez la concentration de travail en collagénase obtenue précédemment (en mg/ml) par son activité spécifique (en unités Wünsch/mg, déterminée ci-dessus) pour obtenir une concentration en unités Wünsch/ml. Pour connaître la quantité de mélange enzymatique Liberase de qualité recherche à utiliser, commencez par multiplier votre concentration de travail en collagénase (en unités Wünsch/ml) par le volume total de votre solution enzymatique de travail de façon à connaître l'activité collagénase totale dont vous avez besoin (en unités Wünsch). Divisez cette valeur par la concentration de la solution mère de mélange Liberase de qualité recherche (voir "Reconstitution et stockage"). Vous obtenez le nombre de millilitres de solution mère de mélange enzymatique Liberase de qualité recherche à ajouter à votre solution enzymatique de travail.


Conditions de stockage (solution de travail) : Conservez la solution mère non utilisée sous forme d'aliquotes à usage unique entre -15 et -25 °C. Pour en savoir plus sur la stabilité du produit, rendez-vous sur le site internet de l'Enzyme Liberase de Roche à l'adresse www.collagenase.com.

Remarque : Éviter les congélations/décongélations répétées !

Reconstituez l'enzyme lyophilisée dans de l'eau stérile pour préparation injectable ou dans un tampon de dissociation tissulaire. N'ajoutez pas de sérum ni aucun autre composé (albumine ou inhibiteurs de protéases, par exemple) dans le tampon de dissociation. La stabilité enzymatique diminue lorsque la concentration et la température augmentent (4 °C). Veillez donc à éviter ces conditions.

Reconstituez la totalité du flacon. Ne divisez pas le lyophilisat en aliquotes. La pénétration d'humidité dans le flacon réduit l'activité enzymatique.

Placez le flacon sur de la glace pour réhydrater l'enzyme lyophilisée.

Agitez-le doucement entre 2 °C et 8 °C jusqu'à dissolution totale de l'enzyme (30 min maximum).

En fonction du type de tampon de dissociation tissulaire utilisé pour dissoudre le mélange enzymatique purifié Liberase de qualité recherche, une légère précipitation peut se produire ; ce précipité se dissout facilement dans la solution de travail diluée et n'a aucun impact sur l'activité enzymatique.

Utilisez une aliquote de la solution mère pour préparer la solution de travail.

Volume de reconstitution

2 ml (1 flacon de 5 à 10 mg)
10 ml (1 flacon de 50 à 100 mg)

Collagénase (unités Wünsch/ml)

13 (1 flacon de 5 à 10 mg)
26 (1 flacon de 50 à 100 mg)Concentration totale en collagénase (mg/ml)

2,5 (1 flacon de 5 à 10 mg)
5,0 (1 flacon de 50 à 100 mg)

À conserver au sec.

Other Notes

• Ce produit est réservé à la recherche en sciences de la vie et à un usage in vitro. Ces produits ne peuvent être utilisés à des fins diagnostiques ou cliniques telles que la greffe d'îlots pancréatiques humains.
• Tous les produits Liberase et Liberase Blendzyme de première génération (Liberase HI, CI, RI, PI et Liberase Blendzyme 1, 2, 3, 4) ont été remplacés par les gammes de mélanges enzymatiques de deuxième génération Liberase de qualité recherche et Liberase de qualité BPF. Pour savoir comment opérer la transition depuis les anciennes enzymes Liberase

Produit destiné uniquement à la recherche en sciences de la vie. Ne pas utiliser dans des procédures de diagnostic.

Legal Information

Dispase is a registered trademark of Godo Shusei Co., Ltd.

Liberase is a trademark of Roche

Informations sur la sécurité

• pictograms: GHS08
• signalword: Danger
• pcodes: P261 - P264 - P280 - P284 - P304 + P340 - P342 + P311
• Hazard Classifications: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2
• Classe de stockage: 11 - Combustible Solids
• wgk: WGK 1
• flash_point_f: does not flash
• flash_point_c: does not flash
• hcodes: H315,H319,H334